[發明專利]一種修復多環芳烴污染土壤酶制劑的制備方法

在審

• 申請號: 201610076034.8
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105524889A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 周麗花;張帆;林大偉
• 申請（專利權）人: 常州市鼎日環保科技有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N1/36;C12N1/20;B09C1/10;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種修復多環芳烴污染土壤酶制劑的制備方法，其特征在于具體制備步驟為：

（1）按接種量為8～10%將醋酸鈣不動桿菌接種于含200～300mg/kg多環芳烴污染土壤的液體無機鹽培養基中，在30～40℃下恒溫搖床振蕩培養1～2周，將菌種馴化以及活化；

（2）再將上述活化后的菌種用接種環轉接到含100～150mg/kg多環芳烴污染土壤的牛肉膏蛋白胨液體培養基中，放入恒溫箱，在35～45℃下恒溫培養7～9天；

（3）待菌種培養結束后，用無菌水緩慢淋洗菌絲表面5～10min，收集淋洗液，得到菌絲懸浮液，放入臥式離心機中，在4～6℃下以6000～8000r/min的轉速離心5～10min分離去除上清液，得到濕菌體；

（4）稱將50～60g上述得到的濕菌體裝入500mL燒杯中，向其中加入300～400mL質量濃度為30%鹽酸胍溶液，放置在超聲振蕩儀中，以200～300W功率超聲振蕩處理2～4h，再以10000～12000r/min的轉速離心3～5min分離去除細胞碎片，將上清液轉入透析袋，用流動蒸餾水透析濃縮至透析液不再渾濁，得濃縮酶液；

（5）將硅藻土和濃縮酶液按固液比為1:5進行混合后放入漩渦振蕩儀中，在4～6℃的冰水浴下以30～40W功率旋渦振蕩固定7～9h，固定結束后用紗網過濾，分離得到沉淀物，沉淀物經真空凍干機干燥后即得一種修復多環芳烴污染土壤酶制劑。

2.根據權利要求1所述的一種修復多環芳烴污染土壤酶制劑的制備方法，其特征在于：所述的液體無機鹽培養基是由1～2g硝酸銨、0.5～1.5g磷酸二氫鉀、1.5～2.5g磷酸氫二鈉、1～3g氯化鈉、0.5～1g蔗糖、20～30g瓊脂和100～200mL蒸餾水復配制得。

3.根據權利要求1所述的一種修復多環芳烴污染土壤酶制劑的制備方法，其特征在于：所述的牛肉膏蛋白胨液體培養基是由0.5～1g牛肉膏、1～3g蛋白胨、0.5～1.5g氯化鈉、1～3g葡萄糖和100～300mL蒸餾水復配制得。