[發(fā)明專利]一種修復(fù)多環(huán)芳烴污染土壤酶制劑的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610076034.8
• 申請(qǐng)日: 2016-02-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105524889A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周麗花;張帆;林大偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 常州市鼎日環(huán)保科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/00
• 分類號(hào): C12N9/00;C12N1/36;C12N1/20;B09C1/10;C12R1/01
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種修復(fù)多環(huán)芳烴污染土壤酶制劑的制備方法，其特征在于具體制備步驟為：

（1）按接種量為8～10%將醋酸鈣不動(dòng)桿菌接種于含200～300mg/kg多環(huán)芳烴污染土壤的液體無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，在30～40℃下恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)1～2周，將菌種馴化以及活化；

（2）再將上述活化后的菌種用接種環(huán)轉(zhuǎn)接到含100～150mg/kg多環(huán)芳烴污染土壤的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，放入恒溫箱，在35～45℃下恒溫培養(yǎng)7～9天；

（3）待菌種培養(yǎng)結(jié)束后，用無(wú)菌水緩慢淋洗菌絲表面5～10min，收集淋洗液，得到菌絲懸浮液，放入臥式離心機(jī)中，在4～6℃下以6000～8000r/min的轉(zhuǎn)速離心5～10min分離去除上清液，得到濕菌體；

（4）稱將50～60g上述得到的濕菌體裝入500mL燒杯中，向其中加入300～400mL質(zhì)量濃度為30%鹽酸胍溶液，放置在超聲振蕩儀中，以200～300W功率超聲振蕩處理2～4h，再以10000～12000r/min的轉(zhuǎn)速離心3～5min分離去除細(xì)胞碎片，將上清液轉(zhuǎn)入透析袋，用流動(dòng)蒸餾水透析濃縮至透析液不再渾濁，得濃縮酶液；

（5）將硅藻土和濃縮酶液按固液比為1:5進(jìn)行混合后放入漩渦振蕩儀中，在4～6℃的冰水浴下以30～40W功率旋渦振蕩固定7～9h，固定結(jié)束后用紗網(wǎng)過(guò)濾，分離得到沉淀物，沉淀物經(jīng)真空凍干機(jī)干燥后即得一種修復(fù)多環(huán)芳烴污染土壤酶制劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種修復(fù)多環(huán)芳烴污染土壤酶制劑的制備方法，其特征在于：所述的液體無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基是由1～2g硝酸銨、0.5～1.5g磷酸二氫鉀、1.5～2.5g磷酸氫二鈉、1～3g氯化鈉、0.5～1g蔗糖、20～30g瓊脂和100～200mL蒸餾水復(fù)配制得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種修復(fù)多環(huán)芳烴污染土壤酶制劑的制備方法，其特征在于：所述的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基是由0.5～1g牛肉膏、1～3g蛋白胨、0.5～1.5g氯化鈉、1～3g葡萄糖和100～300mL蒸餾水復(fù)配制得。