[發(fā)明專利]一種等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610075754.2
• 申請(qǐng)日: 2016-02-03
• 公開（公告）號(hào): CN105675797A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖丹葵;彭尚;周利琴;孫麗霞;孫建華;廖彭瑩;劉彭如;童張法
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N31/16
• 分類號(hào): G01N31/16;G01N25/48
• 代理公司: 深圳新創(chuàng)友知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44223
• 代理人: 江耀純

1.一種等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法，其特征在于，將底 物滴加到含酶的溶液中，檢測出每次滴加后底物與酶反應(yīng)的熱功率，通過設(shè)定滴 加底物的間隔時(shí)間，計(jì)算出不同底物濃度時(shí)熱功率的變化，即可得到酶促反應(yīng)的 米氏常數(shù)K_m和最大酶促反應(yīng)速率v_max。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法， 其特征在于，包括以下步驟：

S1：配制0.1mol/L的緩沖液；

S2：用步驟S1配制好的緩沖液配制0.5μmol/L的酶溶液和10-15mmol/L底 物溶液；

S3：將步驟S2配制好的酶溶液、底物溶液分別注入量熱池和注射器中，在 轉(zhuǎn)速300r/min下攪拌酶溶液，待量熱儀達(dá)到溫度為298.15-313.15K并基線穩(wěn)定 平衡后自動(dòng)開始滴加底物溶液至酶溶液中，計(jì)算出不同底物濃度時(shí)熱功率的變 化，測定得到各個(gè)溫度的米氏常數(shù)K_m和最大酶促反應(yīng)速率v_max。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S1中所述緩沖液為硼酸溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S1中所述緩沖液的pH值為8.3。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S1中所述緩沖液含0.3mol/L的氯化鈉溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S1中所述緩沖液經(jīng)孔徑為0.22μm過濾膜過濾所得。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S2中所述酶為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，所述底物為馬尿酸-組氨酸 -亮氨酸。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S3中將酶溶液注入量熱池中的體積為164μL。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S3中所述量熱儀為等溫滴定量熱儀。

10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S3中所述底物溶液滴加至酶溶液中共20滴，每滴體積為1μL， 每滴時(shí)間間隔為60s，測定時(shí)間為1200s。