[發(fā)明專利]一種等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610075754.2 | 申請日： | 2016-02-03 |
| 公開（公告）號： | CN105675797A | 公開（公告）日： | 2016-06-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 廖丹葵;彭尚;周利琴;孫麗霞;孫建華;廖彭瑩;劉彭如;童張法 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西大學 |
| 主分類號： | G01N31/16 | 分類號： | G01N31/16;G01N25/48 |
| 代理公司： | 深圳新創(chuàng)友知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44223 | 代理人： | 江耀純 |
| 地址： | 530004 廣西壯族*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 等溫 滴定 量熱法 測定 反應(yīng) 動力學 參數(shù) 方法 | ||
1.一種等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法，其特征在于，將底 物滴加到含酶的溶液中，檢測出每次滴加后底物與酶反應(yīng)的熱功率，通過設(shè)定滴 加底物的間隔時間，計算出不同底物濃度時熱功率的變化，即可得到酶促反應(yīng)的 米氏常數(shù)Km和最大酶促反應(yīng)速率vmax。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法， 其特征在于，包括以下步驟：
S1：配制0.1mol/L的緩沖液；
S2：用步驟S1配制好的緩沖液配制0.5μmol/L的酶溶液和10-15mmol/L底 物溶液；
S3：將步驟S2配制好的酶溶液、底物溶液分別注入量熱池和注射器中，在 轉(zhuǎn)速300r/min下攪拌酶溶液，待量熱儀達到溫度為298.15-313.15K并基線穩(wěn)定 平衡后自動開始滴加底物溶液至酶溶液中，計算出不同底物濃度時熱功率的變 化，測定得到各個溫度的米氏常數(shù)Km和最大酶促反應(yīng)速率vmax。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S1中所述緩沖液為硼酸溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S1中所述緩沖液的pH值為8.3。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S1中所述緩沖液含0.3mol/L的氯化鈉溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S1中所述緩沖液經(jīng)孔徑為0.22μm過濾膜過濾所得。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S2中所述酶為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，所述底物為馬尿酸-組氨酸 -亮氨酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S3中將酶溶液注入量熱池中的體積為164μL。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S3中所述量熱儀為等溫滴定量熱儀。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的等溫滴定量熱法測定酶促反應(yīng)動力學參數(shù)的方法， 其特征在于，步驟S3中所述底物溶液滴加至酶溶液中共20滴，每滴體積為1μL， 每滴時間間隔為60s，測定時間為1200s。
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