[發明專利]核酸擴增體系及其凍干保護劑

在審

• 申請號: 201610074303.7
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105463125A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發明（設計）人: 吳凱;李丹;程亮;張琳;王寶中
• 申請（專利權）人: 江蘇正大天創生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，特別是涉及一種應用于核酸擴增體系 的凍干保護劑。

背景技術

聚合酶鏈反應(PCR)技術基于其快速、簡便、靈敏、特異等優點，自 1989年開始就被應用于醫學檢測和臨床檢驗，隨后很快地成為醫學和診斷學 的主要檢測手段之一。

DNA核酸擴增，是一種分子生物學技術，用于放大擴增特定的DNA片 段。利用DNA在體外高溫時變性會變成單鏈，低溫時引物與單鏈按堿基互 補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度，DNA聚合酶沿 著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。PCR的特點是：特異性強、靈敏度 高、簡便快速、純度要求低，廣泛用于各種疾病和腫瘤等的檢測。

RNA核酸擴增，是將RNA的逆轉錄體系和DNA擴增體系相結合的技 術。能夠實現一步對RNA進行檢測，不但操作方便，靈敏度也得到了很大的 提升，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。RT-PCR技術靈敏而且用途 廣泛，已廣泛用于涉及到核酸的科學研究以及臨床疾病的診斷和治療監測。

核酸分子診斷成為了診斷試劑行業的發展方向，熒光定量核酸診斷試劑 是目前市場上最先進的診斷試劑。常規檢測的乙肝、丙肝、艾滋、也可用于 醫院、疾控等臨床樣本中對各種各樣的細菌、病毒感染等疾病的檢測。而且 相對于傳統的培養、鏡檢、免疫學方法等來說，核酸診斷具有其他方法無法 替代的靈敏和及時等優點。

核酸診斷被廣泛應用于各種病原體的檢測上，但是核酸擴增反應試劑在 常溫下保存不穩定，幾周就失效了；在2～8℃條件下保存，保存期也只有三 個月左右；-20℃條件下的保存期雖然可以達到一年之久，但是每次使用必須 要反復凍融，這對試劑的活性也有很大的影響，并且各組分不能混合一起， 用時需混合，操作麻煩等缺點，試劑盒的長期保存和長途運輸將會受到很大 的限制，容易因診斷試劑保存溫度不當而使其敏感性下降甚至完全失效，最 終導致疫病的檢測不及時而造成疫病流行。

目前，市場上核酸擴增反應試劑缺少能在4℃或室溫長期保存的方法， 這也限制了核酸診斷試劑產品的市場。。

核酸技術作為一種新生的高新技術，代表臨床實驗診斷學發展的又一里 程碑，十多年的臨床實踐表明，熒光定量核酸診斷技術已在醫學基礎檢測和 臨床診斷中占據主導地位，因此開發適用于熒光定量核酸試劑常溫保存的相 關技術已迫在眉睫。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于：提供了一種應用于核酸擴增體系的凍 干保護劑。本發明凍干保護劑為應用于熒光定量核酸診斷試劑的凍干技術提 供了一種有效的、可以實現的凍干體系。診斷試劑通過冷凍干燥的技術，液 體試劑變成凍干粉，以凍干粉的形式能更穩定的保存，達到現階段核酸診斷 試劑無法達到的常溫運輸和常溫保存的目的，也減少了試劑反復凍融。檢測 時只需一步水化再加入樣本即可以實現檢測目的，操作簡單。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種核酸擴增體系，包括：緩沖液、 酶混合液、核酸擴增反應液，和，低溫凍干保護劑。

所述緩沖液進一步包括以下組份中的一種或多種：dNTP、Mgcl₂、Thris- Hcl、KCl。

所述酶混合液進一步包括以下組份中的一種或多種：RNA逆轉錄酶、 RAN抑制劑、DNA聚合酶。

所述核酸擴增反應液進一步包括以下組份中的一種或多種：上游引物、 下游引物、探針。

所述凍干保護劑，包括：海藻糖。

所述凍干保護劑中海藻糖使用的終濃度為1～10mmol/L。

所述凍干保護劑中海藻糖使用的終濃度為1.2～5mmol/L。

所述凍干保護劑中海藻糖使用的終濃度為1.5～2.5mmol/L。

所述凍干保護劑進一步包括以下糖類/多元醇中的一種或多種：蔗糖、甘 油醛、阿拉伯糖、來蘇糖、戊糖、核糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、己糖、甘 露糖、塔羅糖、庚糖、葡萄糖、果糖、葡糖酸、山梨醇、乳糖、甲基α吡喃 糖苷、麥芽糖、異抗壞血酸、抗壞血酸、內酯、山梨糖、葡糖二酸、赤蘚糖、 蘇糖、阿拉伯糖、阿洛糖、阿卓糖、蔗糖、古羅糖、艾杜糖、塔羅糖、赤蘚 酮糖、核酮糖、阿洛酮糖、塔格糖、右旋糖酐40。