[發明專利]一種靈敏檢測微量細胞及組織中過氧化氫酶活性的檢測方法

在審

• 申請號: 201610072433.7
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN107022599A
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發明（設計）人: 施冬云;吳美玲
• 申請（專利權）人: 常州萊道斯生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/30
• 分類號: C12Q1/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.化學發光法檢測動物細胞核組織提取物中過氧化氫酶活性的方法,主要涉及生物化學技術領域,解決了現有檢測過氧化氫酶（CAT）的很多方法所存在的流程設計復雜，操作繁瑣，檢測靈敏度低，成本高的問題。

2.（1）該方法的步驟和條件如下：

步驟一、取新鮮或超低溫保存的組織和細胞，加入10%NP-40，pH為8.0的磷酸鹽緩沖液，使用組織勻漿器粗提；

步驟二、使用超聲破碎儀200w，5s，5次；13000rpm/min，4℃條件下離心10min后取上清液即為含過氧化氫酶的混合酶液，保存于0~4℃備用；

步驟三、將含有過氧化氫酶的酶混合液與過氧化氫在室溫下孵育3min；

步驟四、將步驟三中孵育過的過氧化氫反應液加入魯米諾-過氧化氫-氯化鈷反應液中，形成化學發光體系；

步驟五、將步驟四中的反應體系注入到化學發光儀中，對其化學發光值進行檢測1min，以此間接檢測CAT的活性。

3.（2）根據權利要求1所述的化學發光法檢測動物細胞和組織提取物中過氧化氫酶活性的方法，其特征在于，該方法的過氧化氫酶來源為動物細胞和組織提取物。

4.（3）根據權利要求1所述的化學發光法檢測動物細胞即組織提取物中過氧化氫酶活性的方法，其特征在于，該方法反應體系（即魯米諾-過氧化氫-氯化鈷）中的各溶液終濃度為：

① 過氧化氫濃度為2.68mM

② 氯化鈷的濃度為15uM

③ 魯米諾的濃度為54uM

（4）根據權利要求1所述的化學發光法檢測動物細胞及組織提取物中過氧化氫酶活性的方法，其特征在于，該方法所使用的過氧化氫酶的范圍為：20U/ML~100000U/ML

（5）化學發光法測定組織樣品中過氧化氫酶活性的應用

（6）化學發光法測定細胞樣品中過氧化酶活性的應用。