[發明專利]一種團頭魴組織中氯硝柳胺殘留標準物質的制備方法

有效

• 申請號: 201610072226.1
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105467046B
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 劉永濤;索紋紋;楊紅;艾曉輝;胥寧;董靖;楊移斌;楊秋紅
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明屬于食品安全檢測技術領域，更具體涉及一種團頭魴組織中氯硝柳胺殘留標準物質的制備方法，適用于團頭魴血漿、肝臟、腎臟和肌肉組織中氯硝柳胺殘留標準物質的制備。

背景技術

氯硝柳胺，又名殺螺胺，育末生，貝螺殺，滅絳靈，清塘凈等，為一種高效的殺蟲劑，亦是一種人工合成的高效滅螺藥，一般用于殺滅寄生在動物體內的寄生蟲和人體內的絳蟲，主要用于防治血吸蟲，在水產養殖業中氯硝柳胺被用作清塘劑。該藥物不僅殺螺持效長、效率高，同時對血吸蟲尾蚴、螺卵均有明顯殺滅作用，世界衛生組織(WHO)將該藥物作為首推化學滅螺藥。研究發現氯硝柳胺對魚類的毒性屬劇毒，而且氯硝柳胺可引起TA1538株沙門氏菌鼠傷寒菌的染色體發生移碼突變，小鼠骨髓染色體斷裂，小鼠口服氯硝柳胺后小鼠尿液中的2種沙門氏菌均出現突變現象，一定劑量的氯硝柳胺可導致小鼠的精子異常率明顯升高，氯硝柳胺可引起曲霉屬小巢狀曲菌的有絲分裂出現交叉互換和不分離現象，因此，氯硝柳胺是一種具有致突變和基因毒性的藥物。為保障水產品質量安全，進而保護人類的健康，提供一種可靠的定性、定量方法是非常必要的，目前國外僅有兩篇文獻報道了水產品中氯硝柳胺的檢測方法，一篇是采用高效液相色譜紫外法(HPLC-UV)檢測虹鱒和斑點叉尾鮰魚片中氯硝柳胺，由于其樣品前處理過程中提取過程復雜，消耗大量有機溶劑，凈化過程采用固相萃取小柱(SPE柱)，不僅增加了工作量，而且增加了檢測的成本；在檢測方法上該方法所用的流動相(液相)組分復雜，檢測氯硝柳胺的靈敏度低等缺點不能滿足日常檢測的要求；另一篇是采用高效液相色譜串聯質譜法(HPLC-MS/MS)檢測水產品中氯硝柳胺，該研究表明，采用HPLC-MS/MS測定水產品中氯硝柳胺具有靈敏度高、可定性、樣品處理簡單等優點，但測定過程中水產品存在明顯的基質效應，而基質效應會使氯硝柳胺的無法準確定量，目前解決HPLC-MS/MS測定過程中產生的基質效應的最好方法是采用氯硝柳胺的同位素標記標準品或采用相應的基質標準品來定量待測樣品。而目前尚沒有商品化的氯硝柳胺的同位素標記的標準品，為此我們研制了一種團頭魴組織中氯硝柳胺殘留標準物質，并提供了其制備方法。

目前，國內外未見有團頭魴組織中氯硝柳胺殘留標準物質的制備方法的報道或申請專利。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種團頭魴血漿、肝臟和肌肉組織中氯硝柳胺殘留標準物質的制備方法，制備的氯硝柳胺殘留標準物質是采用在水體中添加氯硝柳胺溶液，通過浸泡團頭魴的方式使氯硝柳胺富集到團頭魴的血漿、肝臟和肌肉組織中，使團頭魴血漿、肝臟、腎臟和肌肉組織組織中含有一定濃度的氯硝柳胺，在合適的浸泡時間后取團頭魴的血液、肝臟、肌肉組織，制備出團頭魴血漿、肝臟和肌肉組織中氯硝柳胺殘留標準物質，對團頭魴血漿、肝臟和肌肉組織中氯硝柳胺殘留標準物質的濃度進行定值，并進行均勻性與穩定性檢驗。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

其技術構思是：選取300g～400g的已確認不含氯硝柳胺的團頭魴在1m³水族箱內暫養一周，淡水養殖條件，水溫為24℃～26℃，pH為7.9～8.1，連續充氣，溶解氧值≥5.0mg/L。將9.0mg氯硝柳胺溶解在5mL的二甲基甲酰胺中，再將其投放到320L水體中，水體中氯硝柳胺的濃度為0.028mg/L，將團頭魴放入含有氯硝柳胺的水體中浸泡120h后，取出團頭魴，取團頭魴的血液、肝臟和肌肉組織。團頭魴血液的采集用預先用1％肝素鈉水溶液潤洗過的5mL注射器，從團魴的尾靜脈處取血液，并將采集的血液放入事先用1％肝素鈉水溶液潤洗過的離心管中，4000r/min，離心5min，收集上層血漿，制備出血漿中氯硝柳胺殘留標準物質于干凈的10mL離心管中，-20℃冷凍保存，有效期為3個月；將肝臟組織放于小塑料封口袋中，用手在袋外將袋內肝臟組織碾碎，混勻，制備出血漿中氯硝柳胺殘留標準物質，-20℃冷凍保存，有效期為3個月；將采集的團頭魴的背部肌肉，去皮后切成小塊，用勻漿機將團頭魴肌肉勻質，制備出肌肉中氯硝柳胺殘留標準物質，-20℃冷凍保存，有效期為3個月。

一種團頭魴組織中氯硝柳胺殘留標準物質的制備方法，其步驟是：

A、選取300g～400g已確認不含氯硝柳胺的團頭魴，在1m³水族箱內暫養一周，用于制備團頭魴組織中氯硝柳胺殘留標準物質。淡水養殖條件，水溫為24℃～26℃，pH為7.9～8.1，連續充氣，溶解氧值≥5.0mg/L；