[發明專利]一種團頭魴組織中氯硝柳胺殘留標準物質的制備方法

有效

• 申請號: 201610072226.1
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105467046B
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 劉永濤;索紋紋;楊紅;艾曉輝;胥寧;董靖;楊移斌;楊秋紅
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種團頭魴組織中氯硝柳胺殘留標準物質的制備方法，其步驟是：

A、選取300g～400g已確認不含氯硝柳胺的團頭魴，在水族箱內養一周，用于制備團頭魴組織中氯硝柳胺殘留標準物質，淡水養殖條件，水溫為24℃～26℃，pH為7.9～8.1，連續充氣，溶解氧值≥5.0mg/L；

B、將9.0mg氯硝柳胺溶解在5mL的二甲基甲酰胺中，再將其投放到320L水中，水體中氯硝柳胺的濃度為0.028mg/L，將團頭魴放到水體中進行浸泡，浸泡過程中不飼喂任何飼料；

C、將團頭魴放入含有氯硝柳胺的水體中浸泡110－130h后，取出團頭魴，用蒸餾水沖洗團頭魴的體表2－4次；

D、預先用1％質量和體積比肝素鈉水溶液潤洗過的注射器，從新鮮團頭魴的尾靜脈處取血液，并將采集的血液放入事先用1％肝素鈉水溶液潤洗過的離心管中，4000r/min，離心5min，收集上層血漿，制備出血漿中氯硝柳胺標準物質，于干凈的10mL離心管中，-20℃冷凍保存；

E、將采集完血液的團頭魴體表的鱗片去掉，分別取新鮮團頭魴的肝臟、肌肉組織，將采集的團頭魴的背部肌肉，去皮后切成小塊，用勻漿機將團頭魴肌肉勻質，制備出肌肉中氯硝柳胺標準物質，-20℃冷凍保存；將采集的肝臟組織放于塑料封口袋中，用手在袋外將袋內肝臟組織碾碎，混勻后制備出肝臟中氯硝柳胺標準物質，-20℃冷凍保存；

F、團頭魴血漿樣品前處理：取1mL血漿樣品，加入4mL氨化乙腈pH 8～12，渦旋振蕩28－32s，超聲提取9－11min，加入1.5g無水硫酸鎂，渦旋振蕩28－32s，7000r/min，離心4－6min，轉移上層液體至10mL離心管中，向原試管中再加入4mL氨化乙腈重復提取一次，合并于10mL離心管中，置50℃氮吹儀上，氮吹至干，加入1mL70％體積比乙腈水溶液定容，再加入50mg C18 ODS粉，渦旋振蕩28－32s，離心4－6min，過0.22μm有機系濾頭，獲得從血漿中提取、凈化后含氯硝柳胺供HPLC-MS/MS檢測的液體；

G、團頭魴肝臟樣品的前處理：取1g肝臟樣品，加入4mL氨化乙腈，渦旋振蕩28－32s，超聲提取9－11min，加入1.5g無水硫酸鎂，渦旋振蕩28－32s，7000r/min，離心4－6min，轉移上層液體至10mL離心管中，向原試管中再加入4mL氨化乙腈重復提取一次，合并于10mL離心管中，置50℃氮吹儀上，氮吹至干，加入1mL 70％乙腈水溶液定容，再加入50mg C18 ODS粉，渦旋振蕩28－32s，離心論壇4－6min，過0.22μm有機系濾頭，獲得從肝臟中提取、凈化后含氯硝柳胺可供HPLC-MS/MS檢測的液體；

H、團頭魴肌肉樣品的前處理按照一種檢測水產品中氯硝柳胺的前處理試劑盒及方法進行，獲得從肌肉中提取、凈化后含氯硝柳胺供HPLC-MS/MS檢測的液體；

I、團頭魴血漿、肝臟、肌肉樣品中氯硝柳胺的定值方法，采用高效液相色譜串聯質譜法進行測定，HPLC-MS/MS儀器條件按照一種檢測水產品中氯硝柳胺的前處理試劑盒及方法條件進行設定，獲得團頭魴血漿、肝臟、肌肉組織中氯硝柳胺的殘留量；

所述的1％肝素鈉水溶液的配制方法：稱取1g肝素鈉用蒸餾水溶解并定容至100mL，搖勻后使用，現配現用或4℃冰箱保存，有效期為7d；

所述的氨化乙腈pH值為8～12的配制方法：取稀氨水50μL～200μL加入500mL乙腈中配制成pH值為8～12的氨化乙腈；

所述的稀氨水配制方法：取濃氨水25％～28％用等體積蒸餾水稀釋配制成稀氨水；

所述的70％乙腈水溶液的配制方法：乙腈和雙蒸水按體積比70:30混勻配制而成。