[發明專利]一種產酸性α-淀粉酶的勒克氏菌株的發酵產酶方法

有效

• 申請號: 201610072221.9
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105567602B
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 屈建航;尹伊;李海峰;翟煥趁;胡元森;王金水;蔡靜平;屈凌波
• 申請（專利權）人: 河南工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/26;C12R1/01
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

一種產酸性α?淀粉酶的勒克氏菌株的發酵產酶方法，其特征在于：該方法是以菌種保藏號CGMCC No.11587的Z1?2?1菌株為菌種進行發酵產酶，進而制備出酸性α?淀粉酶，發酵培養基成分：20.2g/L可溶性淀粉，13.9g/L蛋白胨，0.065g/L Ca²⁺，0.03g/L KH₂PO₃，0.025g/L (NH₄)SO₄，發酵產酶條件為溫度38℃，初始pH 5.54。本發明的優點在于：通過篩選優化所得的發酵培養基和產酶方法具有發酵周期短，條件溫和，易于控制，提供的最佳發酵條件，具有產酶效率高，且淀粉酶酶活力高，酶活力穩定等優點。

技術領域

本發明涉及一種產酸性α-淀粉酶的勒克氏菌株的發酵產酶方法，是以Z1-2-1菌株為菌種進行接種發酵產酶的，屬于生物工程領域。

背景技術

淀粉是自然界中僅次于纖維素的第二大多糖儲備物質，是許多食品與非食品行業的重要組成部分。直到19世紀之前，淀粉水解使用的是稀鹽酸的酸水解法，但因該法的糖含量較低且產生一些不必要的化合物，現在幾乎完全被酶水解法取代，α-淀粉酶能將淀粉水解成糊精、麥芽糖、低聚糖和葡萄糖等一系列小分子物質，是目前用途較廣泛的一種酶制劑。現今α-淀粉酶工業生產主要由微生物發酵所得。

液體發酵由于發酵條件可以人為進行調控而被廣泛應用于傳統的工業生產酶制劑當中。但是在發酵過程中，培養基的成分和比例在很大程度上影響著微生物的生長及酶產量。此外，發酵的溫度、pH以及其他的一些物理、化學參數也會對發酵效果起到重要作用，進而最終影響菌株酶產量。因此，為了滿足工業生產中低成本、高產率的需求，需要對篩選獲得的優良菌株發酵條件進行優化，以期利用最低的成本創造最高的經濟價值。

傳統優化生產工藝的方法如單因素法，實驗設計簡單，能夠獲得單個因素的影響，但容易忽視各個因素間的互作關系。而新的統計學方法，比如用響應面設計就可以從眾多發酵條件因素中較快篩選出主效應因子，結合響應面法中的中心組合設計可對篩選出的主效應做進一步的優化，快速獲得最佳的發酵條件，已經被廣泛應用到許多的發酵工藝條件優化中。

發明內容

本發明的目的正是基于上述現有技術狀況而提供的一種產酸性α-淀粉酶的勒克氏菌株的發酵產酶方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種產酸性α-淀粉酶的勒克氏菌株的發酵產酶工藝方法，是以菌種保藏號CGMCCNo. 11587的Z1-2-1菌株（該菌株于2015年11月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號）為菌種進行發酵產酶，進而制備出酸性α-淀粉酶，具體步驟如下：

a、種子培養：培養基成分：10-30 g/L可溶性淀粉，10-20 g/L蛋白胨，0.02-0.06g/L Ca²⁺，0.03 g/L KH₂PO₄，0.025 g/L (NH₄)₂SO₄，pH5-6（優化后為5.54），菌種接入后于38±0.5 ℃、120 rpm搖床培養12h，制成種子液；

b、將a步驟所得種子液以體積比10%接種量，接種于成分同步驟a的培養基中，pH5-6（優化后為5.54），100mL三角瓶裝液量41.28 mL， 38±0.5℃、120 rpm搖床培養12h，作為二級種子液；此條件也即搖瓶發酵，酶活為201.2 U/mL。

c、將b步驟所得二級種子液以體積比10%接種量，接種于小型5L發酵罐，發酵罐內，培養基成分同步驟a的培養基，發酵溫度38±0.5℃，罐壓0.03 MPa，通氣比0.5-1.0 V/V?min，發酵時間為48h，所得酶活為282.6 U/mL。