[發明專利]幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系及其試劑盒和應用

有效

• 申請號: 201610070260.5
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105506161B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 張艷梅;趙虎;胡彬婕;王詩雯;趙付菊;陳飛;繆應新;徐玲麗;吳勇;南麗;孔咪咪;姜文榮;張景皓
• 申請（專利權）人: 華東醫院;寧波海爾施基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12N15/11
• 代理公司: 常州金之壇知識產權代理事務所(普通合伙) 32317
• 代理人: 蔣欣

本發明涉及一種幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系及其試劑盒和應用。幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系包括多對引物，分別針對幽門螺桿菌的菌種鑒定基因（16S rRNA）、耐藥基因（23S rRNA的2143位點、rdxA的148位點、pbp1A的1777位點和gyrA的261位點的多態性），以及定量分析基因ureC和??globin。本發明的幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系及其試劑盒不需要采用常規培養等步驟，可在同一反應體系直接對組織樣本進行菌種鑒定、耐藥和定量的同步檢測和分析，彌補了常規檢測方法通量低、耗時長和檢出率低等缺點，第一時間為臨床提供全面、精準、低成本的病原學診斷，指導幽門螺桿菌感染的精準診斷、個體化用藥，以及療效觀察。

技術領域

本發明涉及一種多重基因檢測產品以及該產品所用到的檢測體系，屬于生物技術領域。

背景技術

幽門螺桿菌（H.pylori）是一種革蘭陰性、微需氧、彎曲狀桿菌，主要寄居在人體胃部。幽門螺桿菌感染與慢性萎縮性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關淋巴組織淋巴瘤和胃癌等發生發展密切相關，因此引起臨床的廣泛關注。1994年，國際癌癥研究機構IARC已將其列為人類I類致癌因子，是目前為止唯一被列為明確對人類致癌的細菌性病原微生物。很多報告認為幽門螺桿菌感染與冠心病、類風濕、肝膽病、肺結核、妊娠嘔吐、直結腸癌及多種皮膚病等疾病有關。流行病學顯示，全球幾乎有一半的人口感染此菌，發展中國家甚至高達60%～70%。因此，幽門螺桿菌感染是世界各國需要面對的公共衛生問題。

幽門螺桿菌的療效與其耐藥性和感染量密切相關。幽門螺桿菌臨床治療的常規藥物包括克拉霉素、甲硝唑、阿莫西林和左氧氟沙星。但是其耐藥現象日益嚴重并呈全球性，極大地影響了臨床療效。

目前幽門螺桿菌的藥敏和定量檢測方法均有其局限性。例如：1）分離培養鑒定：幽門螺桿菌培養成菌落后，經生化反應鑒定。由于幽門螺桿菌培養需要微需氧條件，對營養條件要求苛刻，因此檢出率很低，作為常規診斷手段不易推廣, 且幽門螺桿菌培養需要一定的時間, 不利于快速診斷。2）組織病理切片染色法：該方法是把患者胃鏡檢查活檢組織切片, 染色后可觀察到組織中的幽門螺桿菌。該方法受幽門螺桿菌載量影響明顯，且操作繁瑣、費時，不適于大通量樣本的檢測。3）尿素酶依賴性試驗（尿素呼氣試驗）：根據標志物不同分為¹³C呼吸試驗及¹⁴C呼吸試驗，臨床應用廣泛,。缺點是費用高、易受抑菌藥物和抑酸藥物的影響、敏感度低。4）免疫學檢查：檢測血清中或唾液和尿液中抗體（IgG）或直接檢測糞便中幽門螺桿菌的抗原成分。其缺點是不能反映現癥感染。5）定量分析：常用定量分析方法的是real-time PCR, 但該方法檢測單一、通量小、對多個基因分析時成本高。6）藥敏試驗：該方法耗時長，操作繁瑣，且依賴于分離培養菌株。

綜上所述，如何快速、準確、全面地對幽門螺桿菌進行鑒定、耐藥以及定量分析是本領域的技術人員迫切亟待解決的問題。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種可以快速、全面、準確、低成本的幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系及其試劑盒，以及采用該檢測體系在制備診斷產品方面的應用。