[發明專利]幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系及其試劑盒和應用

有效

• 申請號: 201610070260.5
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105506161B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 張艷梅;趙虎;胡彬婕;王詩雯;趙付菊;陳飛;繆應新;徐玲麗;吳勇;南麗;孔咪咪;姜文榮;張景皓
• 申請（專利權）人: 華東醫院;寧波海爾施基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12N15/11
• 代理公司: 常州金之壇知識產權代理事務所(普通合伙) 32317
• 代理人: 蔣欣

1.一種幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系，其特征在于：包括對菌種鑒定基因16S rRNA進行檢測的引物，分別對耐藥基因23S rRNA的2143位點、rdxA的148位點、pbp1A的1777位點和gyrA的261位點的進行多態性檢測的引物,以及分別對幽門螺桿菌的拷貝數進行定量分析的基因ureC和?-globin進行檢測的引物；所述各引物的正向引物的5’端均設有正向通用引物序列，所述各引物的反向引物的5’端均設有反向通用引物序列；

針對16S rRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，針對16S rRNA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

針對23S rRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.21所示，對應23S rRNA基因2143位點為堿基A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.22所示，對應23S rRNA基因2143位點為堿基G的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.23所示；

針對rdxA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.24所示，對應rdxA基因148位點為堿基C的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.25所示，對應rdxA基因148位點為堿基T的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.26所示；

針對pbp1A基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.27所示，對應pbp1A基因1777位點為堿基A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.28所示，對應pbp1A基因1777位點為堿基G的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.29所示；

針對gyrA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.30所示，對應gyrA基因261位點為堿基C或T的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.31所示，對應gyrA基因261位點為堿基G或A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.32所示；

針對ureC基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.33所示，針對ureC基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.34所示；

針對?-globin基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.35所示，以及針對?-globin基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.36所示；

所述正向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.37所示；

所述反向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.38所示。

2.根據權利要求1所述的幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系，其特征在于：針對16S rRNA和ureC基因的正向引物在檢測體系中的終濃度均為200nM；針對16S rRNA、ureC和?-globin基因的反向引物在檢測體系中的終濃度均為100nM；針對?-globin基因的正向引物在檢測體系中的終濃度為100nM；

針對23S rRNA基因的2143位點、rdxA基因的148位點、pbp1A基因的1777位點和gyrA基因的261位點的正向引物在檢測體系中的終濃度均為100nM；對應23S rRNA基因2143位點為堿基A的反向引物在檢測體系中的終濃度均為300nM；對應23S rRNA基因2143位點為堿基G的反向引物在檢測體系中的終濃度均為350nM；對應rdxA基因148位點為堿基C、對應pbp1A基因1777位點為堿基A、對應gyrA基因261位點為堿基C或T的反向引物、對應rdxA基因148位點為堿基T、對應pbp1A基因1777位點為堿基G的反向引物在檢測體系中的終濃度均為400nM；對應gyrA基因261位點為堿基G或A的反向引物在檢測體系中的終濃度均為450nM。

3.根據權利要求1或2所述的幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系，其特征在于：還包括PCR緩沖液、MgCl₂溶液、dNTPs、熱啟動DNA聚合酶、帶熒光的通用標簽混合物和DNA模板；所述帶熒光的通用標簽混合物中包括反向通用引物和帶有熒光標記的正向通用引物。

4.根據權利要求3所述的幽門螺桿菌耐藥和定量多重基因檢測體系，其特征在于：所述熒光標記為CY5或CY3或FAM。