[發明專利]幽門螺桿菌定性和定量多重基因檢測體系及其試劑盒和應用

有效

• 申請號: 201610070235.7
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105441582B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 張艷梅;趙虎;項平;胡彬婕;趙付菊;周麗芳;吳勇;王詩雯;繆應新;方毅;季大年;黃任翔;陳潔;徐玲麗;孔咪咪;張景皓;姜文榮;陳飛
• 申請（專利權）人: 華東醫院;寧波海爾施基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/6858;C12Q1/06;C12Q1/04
• 代理公司: 常州金之壇知識產權代理事務所(普通合伙) 32317
• 代理人: 蔣欣

1.一種幽門螺桿菌定性和定量多重基因檢測體系，其特征在于：包括對菌種鑒定基因16S rRNA進行檢測的引物,以及分別對幽門螺桿菌的拷貝數進行定量分析的基因ureC和?-globin進行檢測的引物；

所述各引物的正向引物的5’端均設有正向通用引物序列，所述各引物的反向引物的5’端均設有反向通用引物序列；

針對16S rRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，針對16S rRNA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

針對ureC基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.33所示，針對ureC基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.34所示；

針對?-globin基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.35所示，以及針對?-globin基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.36所示；

所述正向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.37所示；

所述反向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.38所示。

2.根據權利要求1所述的幽門螺桿菌定性和定量多重基因檢測體系，其特征在于：針對16S rRNA和ureC基因的正向引物在檢測體系中的終濃度均為200nM；針對16S rRNA、ureC和?-globin基因的反向引物在檢測體系中的終濃度均為100nM；針對?-globin基因的正向引物在檢測體系中的終濃度為100nM。

3.根據權利要求1或2所述的幽門螺桿菌定性和定量多重基因檢測體系，其特征在于：還包括PCR緩沖液、MgCl₂溶液、dNTPs、熱啟動DNA聚合酶、帶熒光的通用標簽混合物和DNA模板；所述帶熒光的通用標簽混合物中包括反向通用引物和帶有熒光標記的正向通用引物。

4.根據權利要求3所述的幽門螺桿菌定性和定量多重基因檢測體系，其特征在于：所述熒光標記為CY5或CY3或FAM。

5.根據權利要求4所述的幽門螺桿菌定性和定量多重基因檢測體系，其特征在于：還包括陽性對照液和陰性對照液；所述陽性對照液是包括所有目的基因靶點的質粒混合物；所述陰性對照液是無核酸酶超純水。

6.根據權利要求4所述的幽門螺桿菌定性和定量多重基因檢測體系，其特征在于：反應時體系中的組分用量為10×的PCR緩沖液1體積，帶熒光的通用標簽混合物和2mmol/L的dNTPs共1體積，25mmol/L的MgCl₂溶液2體積，引物混合物1體積，5U/μL的熱啟動DNA聚合酶1體積， DNA模板2體積，純水2體積；所述DNA模板的使用量為5～50ng/體系。

7.一種采用如權利要求1所述的檢測體系的幽門螺桿菌定性和定量多重基因檢測試劑盒。

8.一種采用如權利要求1所述的檢測體系制備幽門螺桿菌的檢測和診斷產品的應用。