[發(fā)明專利]DNA聚合酶及其編碼基因與應用

有效

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• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN105462942B
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發(fā)明（設計）人: 李卓;盧淑紅;陳孜夢;趙文昭;單大鵬
• 申請（專利權）人: 國家海洋局第三海洋研究所
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/10
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 李巍

本發(fā)明公開了一種DNA聚合酶及其編碼基因與應用。本發(fā)明的DNA聚合酶的氨基酸序列如序列表中序列4所示。編碼DNA聚合酶的基因序列如序列表中序列3所示。本發(fā)明的DNA聚合酶可以在PCR中使用。

技術領域

本發(fā)明涉及一種DNA聚合酶及其編碼基因與應用。

背景技術

DNA聚合酶是細胞復制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶,以DNA為復制模板，將DNA由5'端點開始復制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具備模板、引物、dNTP等的情況下)及其相輔的活性。

耐熱DNA聚合酶多應用在PCR技術中。各種耐熱DNA聚合酶均具有5'-3' 聚合酶活性，但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除錯配，切平末端；5'-3'外切酶活性可以消除合成障礙。

超嗜熱古菌Palaeo coccus pacificus DY20341分離自東太平洋洋中脊熱液區(qū)，其基因組測序已經完成。預測一共有2001個開放閱讀框，其中78.11％沒有確定的生物學功能。

盡管商業(yè)化的DNA聚合酶多種多樣，針對不同擴增目的片段所需的特異DNA聚合酶體系仍然是必要的。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種DNA聚合酶。

本發(fā)明所提供的DNA聚合酶，其氨基酸序列如序列表中序列4所示。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種編碼DNA聚合酶的基因，其核苷酸序列如序列表中序列3所示。

本發(fā)明的又一個目的是提供一種重組表達載體，其多克隆位點上插入有所述的編碼DNA聚合酶的基因。

本發(fā)明的再一個目的是提供一種重組菌，其含有所述的重組表達載體。

其中，所述重組菌為大腸桿菌。

所述的DNA聚合酶可在PCR中應用。

本發(fā)明的又一個目的是提供一種獲得目的基因的方法，所述方法包括如下步驟：

根據目的基因的序列設計引物，

以含有目的基因的DNA片段或基因組DNA為模板，利用所設計的引物和所述的DNA聚合酶進行PCR，

分離PCR產物獲得目的基因。

其中，PCR的緩沖液包括Tris(pH8.8)20mM，MgSO₄2mM，KCl 10mM， (NH₄)₂SO₄10mM，TritonX-100 0.5mg/L，dNTP 0.2mM。

本發(fā)明的又一個目的是提供一種PCR反應試劑盒，所述試劑盒包括所述的 DNA聚合酶。

其中，所述試劑盒還包括PCR的緩沖液，所述PCR的緩沖液包括Tris (pH8.8)20mM，MgSO₄2mM，KCl 10mM，(NH₄)₂SO₄10mM，TritonX-100 0.5mg/L，dNTP 0.2mM。

本發(fā)明的DNA聚合酶，來自超噬熱廣古菌Palaeococcus pacificus DY20341，具有DNA聚合酶活性。利用本發(fā)明的DNA聚合酶，成功擴增出了古菌 Thermococcus sp.4557的大小不同的基因。此外，使用本發(fā)明的DNA聚合酶成功擴增出了商業(yè)化的Pfu DNA聚合酶所不能擴增的Thermococcus sp.4557的 GQS-01815基因。

附圖說明