[發明專利]檢測多發性骨髓瘤克隆進化的基因探針組合物及試劑盒

有效

• 申請號: 201610068948.X
• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN105603087B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 邱錄貴;安剛;秦小琪;劉蘭婷;胡林萍;程濤
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院血液病醫院（血液學研究所）
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司 12211
• 代理人: 張會雪

本發明涉及一種檢測多發性骨髓瘤克隆進化的基因探針組合物及試劑盒，該基因探針組合物，包括TP53基因探針,Rb1基因探針,CKS1B基因探針,CYLD基因探針和BIRC2基因探針。本發明試劑盒可用于對多發性骨髓瘤克隆結構及克隆異質性的分析。

技術領域

本發明涉及一種基因探針組合物及試劑盒，尤其涉及一種檢測多發性骨髓瘤克隆進化的基因探針組合物及試劑盒。

背景技術

多發性骨髓瘤(Multiplemyeloma，MM)是一種異常漿細胞克隆性增生并大多數以產生單克隆免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)為特征的惡性血液系統疾病。MM病程分期明確，從意義未明的單克隆免疫球蛋白血癥(Monoclonalgammopathyofundeterminedsignificance,MGUS)經歷冒煙型骨髓瘤(smolderingmultiplemyeloma,SMM)，到有癥狀骨髓瘤，再到漿細胞白血病(plasmacellleukemia,PCL)或者髓外漿細胞瘤。不同的病程具有其不同的細胞遺傳學異常。因此MM成為研究腫瘤細胞克隆異質性和克隆進化的良好模型。

雖然腫瘤細胞的克隆進化早已被人們注意到，但是對于他的研究卻并無固定的成熟模式。目前主要可以通過比較基因組雜交(comparativegenomichybridization，CGH)、全基因組/外顯子測序(wholegenome/exomesequencing，WG/ES)、單核苷酸多態性(SingleNucleotidePolymorphisms，SNP)等分析。但是上述方法主要分析單個核苷酸水平的變化，這些異常與MM預后之間的聯系目前研究較少，尚不清楚。另外上述方法只能分析大量細胞群混雜的信息，而腫瘤細胞的異質性使得上述分析方法可能遺漏占比例較少部分細胞群的信息。近些年，熒光原位雜交(fluorescenceinsituhybridisation，FISH)技術檢測細胞遺傳學異常成為MM預后分層并指導治療的重要參考因素，并且這些常見細胞遺傳學異常與MM病程及預后密切相關。我們綜合了FISH技術和多參數分析的優勢，采用可以直觀分析單細胞水平細胞遺傳信息變化的多色熒光原位雜交(multicolorfluorescenceinsituhybridization,mFISH)技術，它在單細胞水平通過常見而重要的細胞遺傳學信息可以研究MM克隆進化。

MM常見的分子遺傳學異常包括原發性細胞遺傳學異常和繼發性細胞遺傳學異常，本發明旨在發現MM病程中的細胞遺傳學變化，所以本發明利用mFISH技術研究MM患者不同時間點的常見繼發性細胞分子遺傳學異常(包括TP53,Rb1,CKS1B,CYLD和BIRC2所在的染色體片段即del(17p)、del(13q)、1q21gains、del(16q)、del(11q)，了解初診、復發、緩解、再復發等不同疾病狀態下細胞分子遺傳學的演變，藉此分析MM進展過程中的克隆進化及與臨床治療反應及生存的聯系。

TP53基因定位于17號染色體短臂,包含11個外顯子和10個內含子,其mRNA長25kb,編碼一個含有393個氨基酸的蛋白質,分子量為53kD。在初診MM,其所在片段17p的缺失約為8-10％，隨著疾病進展，在多次復發患者中，其缺失可達40％。該基因的缺失與MM發生、發展關系密切，并與臨床不良預后密切相關。

Rb1基因全長大約200kb,定位于13號染色體長臂,它所編碼的105kD磷酸蛋白參與細胞周期的調控,調控細胞增殖。在初診MM，該基因缺失的檢出率達到40％，但是該基因單獨缺失與MM預后并無明確關聯，它對MM預后的影響取決于是否同時合并其它高危遺傳學異常。

CKS1B基因位于1號染色體長臂，是CDC28蛋白激酶調節亞基1B。在MM，其表達水平與1q21區連鎖擴增拷貝數呈正相關，其高表達與MM不良預后關系密切。在初診MM，該基因所在染色體1q21的擴增約達40％。