[發明專利]一種提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法

在審

• 申請號: 201610068421.7
• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN105510604A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 陳青松;韓鐘;林耀文
• 申請（專利權）人: 浙江夸克生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫學檢驗領域，具體涉及一種混合大小粒徑膠乳同時提高膠乳試劑靈 敏度和線性的方法。

背景技術

C反應蛋白(CRP)是一種急性時相反應蛋白，機體受微生物入侵或組織損傷等炎癥 性刺激后幾小時內產生由肝細胞合成，分子量為115-140KD、半壽期為19天的血清β球蛋白； 在人的血清、腦脊液、胸腹水等多種體液中均可測出。CRP的檢測在臨床應用相當廣泛，包括 急性感染性疾病的診斷和鑒別診斷，手術后感染的監測；抗生素療效的觀察；病程檢測及預 后判斷等。臨床常規測定CRP的方法可在感染或組織損傷時檢測出CRP>10mg/L的濃度，但是 因缺乏較高的靈敏性，不能很好的檢測出低濃度(0.1-10mg/L)的CRP變化，而該濃度的CRP 與新生兒的感染、心血管疾病的發生有著密切的關系，也就是通常所說的超敏CRP(hsCRP)。 近幾年來，隨著檢驗技術的發展，開始出現了一種全量程CRP，這種CRP即能滿足較高的靈敏 度，又能滿足較高的線性，但是限于膠乳比濁技術平臺的限制，這些全量程CRP往往要么降 低敏感性獲得高線性，要么降低線性獲得高靈敏度，因此，對現有的膠乳比濁平臺工藝進行 優化和改進，以同時滿足靈敏度和高線性就成為了一個急需解決的問題。

目前常用的測定CRP濃度的方法有熒光免疫層析法、膠體金法、酶聯免疫吸附法、 膠乳增強免疫比濁法等。其中熒光免疫層析法、膠體金法、酶聯免疫吸附法雖然可以部分同 時解決靈敏度和線性問題，但是只能做到定性或者半定量，尤其在超敏CRP濃度范圍內，測 值準確度很低；常用的膠乳增強免疫比濁法測值準確，但是無法兼顧高靈敏度和寬線性范 圍。

膠乳免疫比濁法分為透射比濁法和散射比濁法。前者用于生化分析儀，后者用于 特定蛋白分析儀。生化分析儀特點是集中樣本檢驗，用時長，但是通量高，成本低。特定蛋白 分析儀比生化分析儀體積小巧，檢測耗時更短，數分鐘內即可出結果，特別適用于門、急診 和床邊監護使用，但是不能處理大批量樣本，成本高。施國民和徐斐在《C反應蛋白快速定量 檢測試劑盒性能評價》中公開將CRP單克隆多克隆抗體用EDC/NHS共價法與羧基化聚苯乙烯 微球結合，制備出用膠乳免疫比濁法檢測CRP的試劑。蛋白載體微球一般用人工合成的高分 子材料制成，用不同的單體聚合成的微球有不同的性能。以苯乙烯為單體通過乳液聚合制 成的直徑為0.8μm左右的微球是常用的微球載體，此種微球的懸液呈乳狀，有良好的懸浮性 能。然而，該試劑盒檢測限0.72mg/L，僅能在此值附近定性確定樣本中含有待測CRP，無法 準確區分超敏CRP的臨界值1mg/L；根據文章發表的回歸方程數據，結合儀器本身的準確度 計算，準確測定樣本的臨界點將會大于1mg/L；另外該試劑僅適用于特定蛋白儀，特定蛋白 儀特點是單個檢驗，用時短，但是無處理大量樣本，無法在全自動生化分析儀上高通量檢 測，因此無法充分滿足臨床診斷的需要。

透射比濁法用于生化分析儀，生化分析儀主要原理是運用光譜技術中不同原子吸 光不同而測量的，那么對于ISE模塊的功能實現，主要有兩種方法，一是比色法，二是間接 法。比色法因其測量精度，準確度等與所要求的相差太大，此法在醫學的早期實驗室檢查中 使用，已經是屬于淘汰的用法。間接法，其方法原理與目前市場上存在的其它儀器所用直接 法相似，但ACA的脆弱性所致，為防儀器內部被堵塞，對樣品的要求極為嚴格，需經常規分離 再經稀釋后方可測量，而一般的生化ISE模塊對樣品的稀釋倍數又大都在30倍左右，在如此 大的稀釋倍數下，對管路確是有益，但從數據統計處理角度來看，這樣的測量，將會把誤差 同比例放大，那么這樣測到的結果，準確度和精確度不能達到要求。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術的不足，提供了一種混合大小粒 徑膠乳同時提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，具有靈敏度高，線性范圍寬，節省抗體用量 等優點。

一種提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，檢測試劑盒包含試劑R1和試劑R2，其特 征在于，所述膠乳試劑為混合大小粒徑膠乳的膠乳試劑，制成C反應蛋白膠乳比濁檢測試劑 盒，該試劑盒包括試劑R1和試劑R2；所述方法包括如下步驟：

1）將鼠待測抗原單克隆抗體定向包被到大粒徑的膠乳微球上，

2）將兔或羊待測抗原多克隆抗體定向包被到小粒徑的膠乳微球上；

3）然后將包被后的大粒徑膠乳和小粒徑膠乳混合。