[發(fā)明專(zhuān)利]一種提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610068421.7
• 申請(qǐng)日: 2016-02-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105510604A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳青松;韓鐘;林耀文
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江夸克生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，其使用的檢測(cè)試劑盒包含試劑R1和試劑 R2，其特征在于，所述膠乳試劑為大小粒徑混合膠乳的膠乳試劑，制成C反應(yīng)蛋白膠乳比濁 檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括試劑R1和試劑R2；所述方法包括如下步驟：

1）將鼠待測(cè)抗原單克隆抗體定向包被到大粒徑的膠乳微球上，

2）將兔或羊待測(cè)抗原多克隆抗體定向包被到小粒徑的膠乳微球上；

3）然后將包被后的大粒徑膠乳和小粒徑膠乳混合。

2.如權(quán)利要求1所述的提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，其特征在于，

所述待測(cè)抗原為C反應(yīng)蛋白；

所述的膠乳微球?yàn)轸然揎椀木郾揭蚁┠z乳微球；

所述的大粒徑膠乳微球的平均粒徑為200-400nm，優(yōu)選300-350；

所述小粒徑膠乳微球的平均粒徑為50-200nm，優(yōu)選50-100nm。

3.如權(quán)利要求1所述的提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，其特征在于，所述的將抗C 反應(yīng)蛋白抗體定向包被到大粒徑膠乳微球上所用的抗體為鼠單克隆抗體，ELISA效價(jià)大于 1:100000；包被到大粒徑膠乳微球上所用的抗體為兔多克隆抗體或者羊多克隆抗體，ELISA 效價(jià)大于1:50000。

4.如權(quán)利要求1所述的提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，其特征在于，

所述試劑R2的制備步驟包括：

1）、取大粒徑或小粒徑聚苯乙烯膠乳顆粒，用2-嗎啉乙磺酸緩沖液溶液MES洗滌三次， 分散；

2）、加入用MES溶液新鮮配制的乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺EDAC溶液，室溫反應(yīng)1小 時(shí)；

3）、加入用的MES溶液新鮮配制的已二酸二酰肼溶液，4℃反應(yīng)過(guò)夜；

4）、用MES溶液洗滌兩次，磷酸鹽緩沖液洗滌一次，分散備用；

5）、分別取鼠單克隆抗體、兔或羊多克隆抗體溶液，加入磷酸鹽緩沖液配制的高碘酸鈉 溶液，室溫混合15分鐘；

6）、將步驟5）中氧化好的抗體加入到步驟4）中激活的聚苯乙烯膠乳微球溶液中，其中 鼠單克隆抗體用來(lái)包被大粒徑膠乳微球，兔或羊多克隆抗體用來(lái)包被小粒徑微球，4℃反應(yīng) 過(guò)夜；

7）、加入牛血清白蛋白溶液，4℃反應(yīng)2小時(shí)；

8）、加入10%葡萄糖溶液，4℃反應(yīng)過(guò)夜；

9）、用氯化銨緩沖液洗滌三次，加入含1.5%蔗糖，0.2%疊氮鈉的，氯化銨緩沖液至膠乳 微球終濃度為0.25%；

10）、將制備的大粒徑膠乳微球和小粒徑膠乳微球按照1:5的體積比進(jìn)行混合，完成試 劑R2的制備。

5.如權(quán)利要求1所述的提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，其特征在于，

按照質(zhì)量份數(shù)計(jì)，

步驟1）中，乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺：聚苯乙烯膠乳顆粒為0.1-1:100，優(yōu)選0.5: 100；

步驟3）中，己二酸二酰肼：聚苯乙烯膠乳顆粒為10-50:100，優(yōu)選50:100。

6.如權(quán)利要求1所述的提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，其特征在于，

步驟5）中，按照質(zhì)量份數(shù)計(jì)，高碘酸鈉:抗體為1:2，其中，抗體為鼠單克隆抗體、兔或 羊多克隆抗體。

7.如權(quán)利要求1所述的提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，其特征在于，

步驟6）中，按照質(zhì)量份數(shù)計(jì)，抗體：激活的聚苯乙烯膠乳微球?yàn)?-20:100，優(yōu)選10-15: 100，步驟8）中，葡萄糖：激活的聚苯乙烯膠乳微球?yàn)?0-50：100，優(yōu)選30-40:100。

8.如權(quán)利要求1所述的提高膠乳試劑靈敏度和線性的方法，其特征在于，

所述的混合大小粒徑膠乳微球中，大粒徑膠乳微球：小粒徑膠乳微球質(zhì)量比為1:3-10， 優(yōu)選2-5，更優(yōu)選2-3。