[發明專利]穿膜肽TAT2在轉基因棉花培育中的應用

在審

• 申請號: 201610068076.7
• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN105567729A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 郝福順;孫立榮;李金侗;張高峰;苗琛
• 申請（專利權）人: 河南大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新

1.穿膜肽TAT2在轉基因棉花培育中的應用，其特征在于，所述穿膜肽TAT2，包括18個氨 基酸，序列如SEQIDNO.1所示，具體為：

Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg；

即RKKRRQRRRRKKRRQRRR；

在棉花雌蕊受精完成后，將混合均勻的待轉化DNA與穿膜肽TAT2溶液通過花粉管注入 子房，用于攜帶擬轉化DNA片段進入棉花基因組。

2.一種穿膜肽TAT2介導的棉花轉基因方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

（1）制備轉化液：由穿膜肽TAT2與待轉化DNA構成；

所述待轉化DNA為質粒DNA、線性DNA、攜帶有外源DNA片段的質粒DNA或攜帶有外源DNA 片段的線性DNA；

（2）棉花受精后注入轉化液：棉花開花并受精完成后，將步驟（1）中混合均勻的轉化液 通過花粉管注入子房；

（3）篩選轉化植株：對步驟（2）中注射后棉花繼續培育，收獲種子并篩選陽性植株。

3.如權利要求2所述穿膜肽TAT2介導的棉花轉基因方法，其特征在于，

所述質粒DNA為pCAMBIA1300-221質粒；

所述線性DNA為從pCAMBIA1300-221質粒PCR擴增出的除骨架外的DNA序列，長度為6510 bp，PCR擴增時，引物序列設計如下：

1300-221F：5′-GGACTGATGGGCTGCCTGTATC-3′，

1300-221R：5′-GCACATACAAATGGACGAACGG-3′。