[發明專利]一種用于串珠藻的培養基及其應用

有效

• 申請號: 201610067835.8
• 申請日: 2016-01-30
• 公開（公告）號: CN105543098B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 南芳茹;謝樹蓮;馮佳;呂俊平;劉琪
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

1.一種適合串珠藻生長的培養基，其特征在于，組分及其濃度：NaNO₃ 2.90-2.94mM，K₂HPO₄ 0.41-0.44mM，KH₂PO₄ 1.27-1.31mM，MgSO₄·7H₂O 0.29-0.31mM，CaCl₂ 0.15-0.18mM，NaCl 0.42-0.44mM，PIV金屬溶液5.9-6.1mL/L，維生素B12溶液0.8-1.1mL/L，維生素H溶液0.8-1.1mL/L，維生素B1溶液0.8-1.1mL/L，青霉素-鏈霉素溶液0.008-0.009mL/L；

所述的PIV金屬溶液的組分及其含量：Na₂EDTA·2H₂O 1.9-2.1mM，FeCl₃·6H₂O 0.35-0.37mM，MnCl₂·4H₂O 0.19-0.22mM，ZnCl₂ 0.035-0.038mM，CoCl₂·6H₂O 0.0082-0.0084mM，Na₂MoO₄·2H₂O 0.015-0.018mM；

所述的維生素B12溶液通過如下方法制得：于200mLdH₂O中加入pH7.8的HEPES緩沖液2.39-2.41g和維生素B12 0.025-0.027g；

所述的維生素H溶液通過如下方法制得：于200mLdH₂O中加入pH7.8的HEPES緩沖液2.39-2.41g和維生素H 0.004-0.005g；

所述維生素B1溶液通過如下方法制得：于200mLdH₂O中加入pH7.8的HEPES緩沖液2.39-2.41g和維生素B1 0.066-0.068g。

2.一種串珠藻的液體培養基的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)于滅菌的1L容器中加900mL蒸餾水，攪拌下，按照權利要求1所述培養基組分及其濃度計算各組分加入量，將除了維生素和青霉素-鏈霉素溶液以外的各組分加入上述容器中；

2)待所有無機鹽組分加入后，加入蒸餾水至容器中液體總體積成為1L；

3)用封口膜封蓋容器口，置于高溫滅菌鍋，120℃高溫滅菌30min；

4)滅菌完成后，冷卻至室溫，加入上述組分濃度規定量的維生素B12，維生素H，維生素B1，青霉素-鏈霉素溶液；

5)得到的液體培養基置于4℃冰箱存儲。

3.一種串珠藻的固體培養基平板的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)于滅菌的1L容器中加900mL蒸餾水，攪拌下，按照權利要求1所述培養基組分及其濃度計算各組分加入量，將除了維生素和青霉素-鏈霉素溶液以外的各組分加入上述容器中；

2)待所有無機鹽組分加入后，加入15g瓊脂糖，加入蒸餾水至容器中液體總體積成為1L，使用玻璃棒攪拌均勻；

3)用封口膜封蓋容器口，置于高溫滅菌鍋，120℃高溫滅菌30min；

4)滅菌完成后，冷卻至室溫，加入上述組分濃度規定量的維生素B12，維生素H，維生素B1，青霉素-鏈霉素溶液；

5)在其凝固之前倒入滅菌的培養皿中，制成固體培養基平板，置于4℃冰箱暫時存放。

4.一種串珠藻的培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)將野外采集的串珠藻放入采集瓶中，瓶中裝入生境處潔凈清涼的流動水，用于浸泡采集到的藻體；

2)樣品帶回實驗室后，用流動水清洗藻體表面附著物，藻體置于培養皿中，在解剖鏡下用鑷子、解剖針去除可見的雜物；

3)用解剖刀將藻體切割成若干盡可能小的碎片，將藻體碎片接入權利要求3所制備的固體培養基平板中；

4)將平板置于光照培養箱中培養，培養條件為16.5℃,光照強度為1000Lx，光暗周期各為12小時；

5)待藻體發育為肉眼可見的藻絲后，將其轉入裝有權利要求2所制備的液體培養基的錐形瓶中進行后續培養，錐形瓶中還添加滅菌的陶粒作為培養基質，將培養體系置于恒溫震蕩器中，設置培養溫度為16.5℃，震蕩頻率為120r/min。