[發(fā)明專利]一種基于血液凝集活性的血栓通凍干粉針質量檢測方法

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• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105606831A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發(fā)明（設計）人: 唐進法;張國斌;裴莉昕;李偉霞;崔紅新;李宇輝;張帆
• 申請（專利權）人: 河南中醫(yī)學院
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種基于血液凝集活性的血栓通凍干粉針質量檢測方 法。

背景技術

采用生物活性測定的方法對中藥進行質量控制已被廣泛認可。由此而制定的“中 藥生物活性測定指導原則”已被《中國藥典》（2010年版一部以及2015年版四部）附錄收載。 當前中藥（包括中成藥）的“生物活性測定”已成為中藥質量檢測重點發(fā)展方法之一。

血栓通凍干粉針是臨床常用的活血祛瘀中成藥，具有擴張血管，改善血液循環(huán)作 用，常用于視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞，腦血管病后遺癥，內眼病，眼前房出血等，因療效確切，被 遴選為國家基本藥物，其質量控制方法為：以人參皂苷Rg1為對照品，采用高效液相法檢測 三七總皂苷的含量。然而三七總皂苷是一類化學成分而不是單一成分，具有不同成分之間 比例關系復雜，藥理作用靶點不單一，功效多樣等特點。僅僅以人參皂苷Rg1為對照品，間 接反映三七總皂苷的含量，難以綜合關聯(lián)血栓通凍干粉針的整體功效。因此含量檢測（測 定）的方法是不能完全達到血栓通凍干粉針內在質量控制目標的。生物活性檢測的方法相 對于化學含量檢測方法直接關聯(lián)藥效，尤其適用于成分復雜的中藥、中成藥、生物制劑等藥 物的質量檢測。因此，采用生物活性檢測的方法對血栓通凍干粉針進行質量控制符合中成 藥自身特點，將有獨到優(yōu)勢，但至今未見有采用生物活性檢測血栓通凍干粉質量方法的公 開報導。

發(fā)明內容

針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種基于血液凝 集活性的血栓通凍干粉針質量檢測方法，可有效解決血栓通凍干粉針的質量檢測，從而實 現(xiàn)對血栓通凍干粉針的質量控制，保證血栓通凍干粉針的質量問題。

本發(fā)明解決的技術方案是，由以下方法實現(xiàn)：

（1）、制備供測試的血漿，將檸檬酸鹽緩沖液0.2ml裝入注射器，用注射器經成年雄性家 兔耳緣動脈吸取血液5ml，離心，得血漿；

（2）、將血栓通凍干粉針用生理鹽水倍比稀釋成10個濃度梯度；

（3）、將血漿點入血漿點樣孔板中，再將10個不同濃度梯度的血栓通凍干粉針分別加入 點入血漿的10個孔中，每個濃度重復3孔；并設陰性對照組；

（4）、檢測血凝塊形成的時間：用凝集檢測儀（Schnitter+Gross協(xié)同凝集檢測儀， Amelung，Brake）檢測血漿樣的血凝塊形成時間并記錄；

（5）、血栓通凍干粉針質量的判定：根據(jù)步驟（4）凝集檢測儀記錄的血凝塊形成的時間， 以不出現(xiàn)凝血塊的血栓通凍干粉針的最大稀釋倍數(shù)的時間作為其量值（作倍比稀釋，稀釋 倍數(shù)以2為底的指數(shù)形式表示，以該指數(shù)為其量值），用于判定血栓通凍干粉針的質量，量值 越大，血栓通凍干粉針的活血功效越好，質量越優(yōu)，從而測定出血栓通凍干粉針的質量。

本發(fā)明方法科學，易操作，測定速度快，效率高，方法穩(wěn)定可靠，準確，是血栓通凍 干粉針質量檢測上的一大創(chuàng)新，有效保證了血栓通凍干粉針的質量，防止偽劣產品對人身 體健康的危害，經濟和社會效益巨大。

具體實施方式

以下結合具體情況對本發(fā)明的具體實施方式作詳細說明。

本發(fā)明在具體實施中，由以下方法實現(xiàn)：

（1）、制備供測試的血漿

在溫度20-26℃、濕度60%的環(huán)境下，將PH4.5的檸檬酸鹽緩沖液0.2ml（或濃度為 100mmol/L的檸檬酸鹽緩沖液0.2ml）裝入注射器，用注射器經成年雄性家兔耳緣動脈吸取 血液5ml，置于離心管中，以1500g的速度離心10min，得血漿；

（2）、將血栓通凍干粉針稀釋成不同濃度，方法是，用質量濃度0.9%的生理鹽水將血栓 通凍干粉針倍比稀釋成10個濃度梯度；

所述的倍比稀釋是指稀釋后的下一級血栓通凍干粉針（樣品）的濃度是上一級濃度的 0.5倍；

（3）、將步驟（1）制得的血漿點入血漿點樣孔板中的3排，每排10孔，每孔0.1ml；另將血 漿點入另相鄰的3個孔中，每孔0.1ml，作為陰性對照組，在37℃下孵育5min，加入0.2ml人促 凝血酶（ThromborelBehringWerke，Marburg）；將步驟（2）制得的10個不同濃度梯度的血 栓通凍干粉針0.1ml用排槍分別加入點入血漿的10個孔中，每個濃度重復3孔，陰性對照組 中加入質量濃度0.9%的生理鹽水0.1ml；