[發(fā)明專利]一種高效檢測水稻抗性基因Pita的特異性引物、分子標記及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610064583.3
• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN105506152B
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發(fā)明（設計）人: 劉立娜;李成云;楊靜;張寒
• 申請（專利權）人: 云南農業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 賽曉剛

1.一種高效檢測水稻抗性基因Pita關鍵抗病位點的特異性引物，其特征在于：所述引物由前引物6640F和后引物7415R組成，所述的引物序列：

前引物6640F：5’-GTGGCTTCTATCTTTACCTG-3’

后引物7415R：5’-CGAACTCCTTCGCATACTCA-3’。

2.一種利用分子標記檢測水稻抗性基因Pita抗病基因型的方法，包括以下步驟：

(1)待測樣品水稻植株基因組DNA提取；

(2)以步驟(1)中得到的樣品DNA為模板，構建專用PCR反應體系，利用權利要求1所述特異性引物進行PCR擴增；

(3)利用瓊脂糖凝膠電泳對PCR擴增產物進行檢測，當PCR產物為陽性時，也即能獲得條帶長度為814bp的PCR產物，該水稻品種對含AVR-Pita稻瘟病菌具有抗性；反之，當PCR產物為陰性時，即不能獲得條帶長度為814bp的PCR產物，該水稻品種對含AVR-Pita稻瘟病菌具有感病性。

3.根據權利要求2所述的利用分子標記檢測水稻抗性基因Pita抗病基因型的方法，其特征在于：所述的專用PCR反應體系為:10×PCR反應緩沖液2.8μl；2.5mM dNTP 1.0μl；BSA1.0μl；前引物0.8μl；后引物0.8μl；r-taq酶0.25μl；20ng/μl DNA為1.0μl；加水至總體積為25μl。

4.根據權利要求2或3所述的利用分子標記檢測水稻抗性基因Pita抗病基因型的方法，其特征在于：所述專用PCR的反應條件為：94℃預變性3min，94℃變性30sec，53℃～60℃退火30sec，72℃延伸1min，共運行33個循環(huán)，72℃后延伸10min。