[發明專利]基于牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的硫離子檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201610064095.2
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105717097A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 陳偉;沈奕珉;何少斌;鄧豪華;吳艷玉
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N21/31
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

技術領域

本發明涉及以牛血清白蛋白-納米鉑/鉍為模擬過氧化物酶的硫離子快速含量測定方法及試劑盒，屬于分析化學和納米技術領域。

背景技術

隨著工業科技的飛速發展，環境問題變得越發嚴重。硫化物是造紙、石化、皮革等行業常見的化工原料和化學污染物，對水生態系統和人類健康均產生危害。在酸性條件下，硫化物轉變為硫化氫，可危害細胞色素、氧化酶，造成細胞組織缺氧，甚至危及生命。同時硫化氫還腐蝕金屬設備和管道，并可被微生物氧化成硫酸，加劇腐蝕性。硫化物易溶于水，因此，硫化物還是水體污染的重要指標之一，水體又與人們的日常生活緊密相關，所以建立一種快速、簡易、實用的方法對于水體中的硫離子進行檢測非常必要。目前，硫化物的檢測方法主要包括電化學、色譜等。然而，這些方法需要復雜的樣品預處理過程，處理過程相對費時，費用相對較大。

近年來基于鉑納米材料的生物傳感器得到了廣泛的關注，這些材料的模擬過氧化物酶催化活性高，催化效果好，抗干擾能力強，因此能夠應用于各種生物檢測領域，更重要的是這些材料大多可提供肉眼識別信號的比色法檢測，具有簡單，快速，適用于實時和現場檢測等優點。

本發明利用牛血清白蛋白-納米鉑/鉍與硫離子相互作用后其模擬過氧化物酶活性的變化，通過牛血清白蛋白-納米鉑/鉍催化過氧化氫氧化3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽顯色，提供了一種快速、簡便、靈敏的硫離子檢測新方法及試劑盒檢測試劑盒。

發明內容

本發明的一個目的是利用牛血清白蛋白-納米鉑/鉍與硫離子相互作用后其模擬過氧化物酶活性的變化，通過牛血清白蛋白-納米鉑/鉍催化過氧化氫氧化3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽顯色，提供了一種快速、簡便、靈敏的硫離子檢測新方法。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明所述的基于牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的硫離子測定方法，其特征是在硫離子溶液中加入牛血清白蛋白-納米鉑/鉍溶液，混合后室溫靜置，在混合溶液中加入過氧化氫，3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽，含有乙二胺四乙酸的磷酸鹽緩沖溶液，混合后37℃溫度溫浴，根據652nm處的吸光度得到硫離子濃度；所述的牛血清白蛋白-納米鉑/鉍是由如下方法制備的：在5mL濃度為50mg/mL的牛血清白蛋白水溶液中加入5mL濃度為16mmol/L氯鉑酸溶液和0.5mL濃度為1.5mol/L氫氧化鈉溶液，混勻后水浴80℃下反應2h，反應后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-納米鉑水溶液，將牛血清白蛋白-納米鉑水溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑粉末，在0.6mL濃度為23.8mg/mL的牛血清白蛋白-鉑水溶液中加入0.6mL濃度為0.5mmol/L的硝酸鉍溶液和1.8mL濃度為10mmol/L，pH=7的磷酸鹽緩沖液，混勻后水浴80℃下反應2.5h，反應后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的水溶液，將牛血清白蛋白-納米鉑/鉍水溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑/鉍粉末。

所述的牛血清白蛋白-納米鉑/鉍與硫離子相互作用后其模擬過氧化物酶活性降低，催化過氧化氫氧化3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽顯色能力下降，催化反應產物在652nm處的吸光度減小。

所述的基于牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的硫離子測定方法，其特征是在0.4mL硫離子溶液中加入0.01mL濃度為4.76mg/mL的牛血清白蛋白-納米鉑/鉍溶液，混合后在室溫放置2分鐘，在混合溶液中加入1mL濃度為2mol/L的過氧化氫，0.2mL濃度為16mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽，2.39mL含有乙二胺四乙酸的濃度為100mmol/L，pH=5的磷酸鹽緩沖溶液，所述緩沖溶液中乙二胺四乙酸的濃度為4mmol/L，混合后37℃溫浴10分鐘，測定652nm波長處的吸光度，隨著硫離子濃度的增大，吸光度逐漸減小。

所述的基于牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的硫離子測定方法，其特征是檢測線性范圍為0.08~4μmol/L，檢測限為50nmol/L。

本發明采用以下具體技術方案：

（一）牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的制備：