[發明專利]基于鉍-牛血清白蛋白-納米鉑的過氧化氫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201610063564.9
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105628700B
• 公開（公告）日: 2018-09-11
• 發明（設計）人: 陳偉;沈奕珉;施小瓊;鄧豪華;鄭曉晴
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

本發明公開了一種基于鉍?牛血清白蛋白?納米鉑的過氧化氫檢測試劑盒。本發明利用鉍?牛血清白蛋白?納米鉑催化過氧化氫氧化3,3’,5,5’?四甲基聯苯胺鹽酸鹽顯色，提供了一種快速、簡便、靈敏的過氧化氫檢測方法。該檢測方法和試劑盒所用鉍?牛血清白蛋白?納米鉑制備簡便。可以通過肉眼觀察和測定吸光值實現對腫瘤細胞和正常細胞的區分，并且可根據吸光值計算出過氧化氫的釋放量和釋放速度。

技術領域

本發明提供一種新型的細胞外過氧化氫含量快速檢測方法及試劑盒。其涉及一種基于鉍-牛血清白蛋白-納米鉑模擬過氧化物酶的過氧化氫的檢測方法，屬于分析化學、納米技術和細胞生物學領域。

背景技術

過氧化氫是一種生命活動中非常重要的活性中間體，同時在食品生產、紙張漂白劑、消毒劑、燃料電池、酶法分析等領域如中起著重要的作用，因此對過氧化氫進行高靈敏度、高選擇性的分析與檢測是極為必要的。近年來的研究發現，一些腫瘤細胞如乳腺癌細胞、腎癌細胞、肺癌細胞等所釋放的過氧化氫量遠多于正常細胞，因此如何快速準確地通過檢測細胞外過氧化氫的含量來識別腫瘤細胞以及檢測腫瘤細胞的數量對于研究腫瘤的產生發展機制以及抗腫瘤藥物作用機制有著重要的意義。

酶是高效的生物催化劑，生物體內幾乎所有的反應都有酶的參與。酶法分析在臨床診斷、生物、食品、化學、環境等領域都有廣泛的應用。酶催化反應因其具有高效、專一、條件溫和等特點而備受關注。然而天然酶來源有限，提純困難，價格昂貴，而且為了保持其活性要求實驗條件和操作環境都較為苛刻，使其應用受到了極大的限制，因此模擬酶的開發及應用研究越來越受到人們的關注。

本發明基于鉍-牛血清白蛋白-納米鉑的模擬過氧化物酶特性，利用過氧化氫作為電子受體參與鉍-牛血清白蛋白-納米鉑模擬過氧化物酶催化的顯色反應，提供了一種比色檢測細胞外過氧化氫的新方法及檢測試劑盒。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種基于鉍-牛血清白蛋白-納米鉑模擬過氧化物酶活性比色檢測細胞外過氧化氫的方法。

為了實現上述檢測方法的目的，本發明采用以下技術方案：

本發明所述的一種基于鉍-牛血清白蛋白-納米鉑模擬過氧化物酶的過氧化氫檢測方法，其特征是將過氧化氫，3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽，鉍-牛血清白蛋白-納米鉑水溶液混合后恒溫孵育，加入0.5 mol/L的硫酸終止反應，反應產物為黃色，最大吸收波長為450 nm；所述的鉍-牛血清白蛋白-納米鉑模擬過氧化物酶由以下步驟制得：在5 mL濃度為50 mg/mL的牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL濃度為16 mmol/L氯鉑酸溶液和0.5 mL濃度為1.5 mol/L氫氧化鈉溶液，混勻后水浴80 ℃下反應2 h，反應后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-納米鉑水溶液，將牛血清白蛋白-納米鉑水溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑粉末，在0.6 mL濃度為23.8 mg/mL的牛血清白蛋白-鉑水溶液中加入0.6 mL濃度為0.5 mmol/L的硝酸鉍溶液和1.8 mL 濃度為10 mmol/L，pH=7的磷酸鹽緩沖液，混勻后水浴80 ℃下反應2.5 h，反應后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到鉍-牛血清白蛋白-納米鉑的水溶液；將鉍-牛血清白蛋白-納米鉑水溶液冷凍干燥得到鉍-牛血清白蛋白-納米鉑粉末。

所述的基于鉍-牛血清白蛋白-納米鉑模擬過氧化物酶的過氧化氫檢測方法，其特征是能根據顯色體系溶液顏色判斷過氧化氫的濃度。

所述的基于鉍-牛血清白蛋白-納米鉑模擬過氧化物酶的過氧化氫檢測方法，其特征是能根據酶標儀450 nm處的吸光度以檢測過氧化氫的濃度。

所述的基于鉍-牛血清白蛋白-納米鉑模擬過氧化物酶的過氧化氫檢測方法，其特征是檢測線性范圍為0.5~30 μmol/L，檢測限為0.068 μmol/L。