[發明專利]葉酸-牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料

有效

• 申請號: 201610061539.7
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105548059B
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 陳偉;沈奕珉;鄧豪華;李光文;李柯林
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N21/31;G01N33/574
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

本發明公開一種葉酸?牛血清白蛋白?鉑鉍納米復合材料，通過蛋白質與葉酸分子的交聯，合成葉酸?牛血清白蛋白?鉑鉍納米復合材料。葉酸?牛血清白蛋白?鉑鉍納米復合材料在保留牛血清白蛋白?鉑鉍納米復合材料高催化活性的基礎上還能夠特異性識別細胞表面葉酸受體，利用3,3’,5,5’?四甲基聯苯胺鹽酸鹽顯色反應，可快速靈敏地檢測表面葉酸受體高表達的腫瘤細胞。

技術領域

本發明涉及葉酸-牛血清白蛋白-納米鉑鉍納米復合材料及其制備方法，并提供一種基于葉酸-牛血清白蛋白-納米鉑鉍納米復合材料快速靈敏地檢測葉酸受體高表達的腫瘤細胞的方法和檢測試劑盒。屬于納米技術和生命分析技術領域。

背景技術

葉酸是一種小分子維生素，廣泛分布在人體中，起重要的生理作用。自1986年科學家發現葉酸是由受體介導的內吞途徑進入細胞以來，人們開始對葉酸作為靶向載體進行深入研究。專家已經證實在卵巢癌、腎癌、頭頸部腫瘤、肺癌、乳腺癌、結直腸癌等惡性上皮組織來源腫瘤、關節炎部位有過表達的葉酸受體。因此，葉酸作為其靶向標記物，能夠和葉酸受體進行特異性結合就能與葉酸受體特異性結合并選擇性濃集于葉酸受體表達豐富的組織（腫瘤）中，如果對結合的葉酸做顏色等標記，我們便可以從各種醫學顯影手段上定位觀察出病灶濃集的區域，并針對該區域進行治療，其集中性、準確性對于癌癥治療的療效提供了巨大的幫助。與其他靶向分子如單克隆抗體相比，葉酸相對分子質量小、無免疫原性、價廉易得、穩定性好、與藥物或載體之間的化學鍵合簡單易行。

生物分子復合納米材料是在對生物礦化分子進行充分研究的基礎上，利用礦化分子中的小肽和蛋白質設計和制備的無機納米材料。利用蛋白質為模板制備的復合納米材料在三維空間中至少有一維處于納米尺度范圍或者由該尺度范圍的物質為基本結構單元所構成，其尺度已經接近光的波長并且具有大表面的特殊效應, 因此該類材料是一種典型的介觀系統，具有表面效應、小尺寸效應、宏觀量子隧道效應和量子限域效應。

本發明以牛血清白蛋白為模板，制備一種牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料，通過蛋白質羧基和葉酸分子的氨基進行交聯反應，合成葉酸-牛血清白蛋白-納米鉑鉍納米復合材料。該納米復合材料具有模擬過氧化物酶活性并能與葉酸受體特異性結合，可用于快速靈敏地檢測葉酸受體高表達的腫瘤細胞檢測。

發明內容

本發明的目的是以牛血清白蛋白為模板，制備一種牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料，以及通過蛋白質羧基和葉酸分子的氨基進行交聯反應，提供一種合成葉酸-牛血清白蛋白-納米鉑鉍納米復合材料的方法。該納米復合材料具有模擬過氧化物酶活性并能與葉酸受體特異性結合，可用于快速靈敏地檢測葉酸受體高表達的腫瘤細胞檢測。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明所述的一種葉酸-牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料，其特征是由以下方法制備而成的：在葉酸水溶液中，加入1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亞胺，反應后，加入牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料水溶液，反應后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到葉酸-牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料水溶液，將葉酸-牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料水溶液冷凍干燥得到葉酸-牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料粉末；所述葉酸-牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料具有模擬過氧化物酶活性，能催化過氧化氫氧化3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽顯色，并能識別細胞膜表面葉酸受體。

所述的一種葉酸-牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料，其特征是在2.79 mL濃度為100 mmol/L，pH =5的磷酸鹽緩沖液中依次加入1 mL濃度為2 mol/L的過氧化氫、0.2 mL濃度為16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽、10 μL濃度為4.76 mg/mL的葉酸-牛血清白蛋白-鉑鉍納米復合材料水溶液， 37 ℃溫浴10分鐘，溶液由無色變為藍色，在652 nm處有吸收峰。