[發明專利]快速檢測豬2型圓環病毒的實時熒光RPA試劑盒、試紙條RPA試劑盒及其用途

有效

• 申請號: 201610060957.4
• 申請日: 2016-01-28
• 公開（公告）號: CN105525040B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 張志東;楊洋;秦曉東;孫英軍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種用于快速檢測豬2型圓環病毒的實時熒光RPA檢測試劑盒，其特征在于包括有一對引物和一條探針，

其中，所述的一對引物和一條探針的序列如下所示：

上游引物：5’-AAACCTGTCCTAGATTCCACTATTGATTACTTCCA-3’

下游引物：5’-TTGTATTCCTGGTCGTATATACTGTTTTCGAACGC-3’

探針：5’-ATTACTTCCAACCAAACAACAAAAGAAATCAGCTG

-FAM-dT-G-THF-C-BHQ1-dT-GAGACTACAAACTGC-P-3’。

2.如權利要求1所述的實時熒光RPA檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒中還包括水解緩沖液，醋酸鎂以及ddH₂O。

3.如權利要求1或2所述的實時熒光RPA檢測試劑盒，其特征在于用于檢測豬2型圓環病毒時，反應體系如下：14.75μL的水解緩沖液，1.05μL的10μM上游引物，1.05μL的10μM下游引物，0.075μL的10μM探針，2μL的病毒DNA模板，4.825μL的ddH₂O以及1.25μL的280mM醋酸鎂；

擴增反應在溫度設定為37-39℃的實時熒光定量PCR儀中進行，反應時間為20min-1h，結束后通過Mx3005P軟件對結果進行分析。

4.如權利要求3所述的實時熒光RPA檢測試劑盒，其特征在于擴增反應在溫度設定為37℃的實時熒光定量PCR儀中進行，反應時間為20min，結束后通過Mx3005P軟件對結果進行分析。

5.權利要求1-4任一項所述的實時熒光RPA檢測試劑盒在制備檢測豬2型圓環病毒試劑中的用途。

6.一種用于快速檢測豬2型圓環病毒的試紙條RPA檢測試劑盒，含有側流層析試紙條，其特征在于還包括有一對引物和一條探針，

其中，所述的一對引物和一條探針的序列如下所示：

上游引物：5’-AAACCTGTCCTAGATTCCACTATTGATTACTTCCA-3’

下游引物：5’-biotin-TTGTATTCCTGGTCGTATATACTGTTTTCGAACGC-3’

探針：5’-FAM-TACTTCCAACCAAACAACAAAAGAAATCAGCTGTG-THF-CTGAGACTACAAACT-P-3’。

7.如權利要求6所述的試紙條RPA檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒中還包括水解緩沖液，醋酸鎂以及ddH₂O。

8.如權利要求6或7所述的試紙條RPA檢測試劑盒，其特征在于用于檢測豬2型圓環病毒時，反應體系如下：14.75μL的水解緩沖液，1.05μL的10μM上游引物，1.05μL的10μM下游引物，0.075μL的10μM探針，2μL的病毒DNA模板，4.825μL的ddH₂O以及1.25μL的280mM醋酸鎂；

擴增反應在溫度設定為35-45℃的水浴鍋中進行，反應時間為15min-30min，結束后使用側流層析試紙條對結果進行檢測。

9.如權利要求8所述的試紙條RPA檢測試劑盒，其特征在于擴增反應在溫度設定為37℃的水浴鍋中進行，反應時間為20min，結束后使用側流層析試紙條對結果進行檢測。

10.權利要求6-9任一項所述的試紙條RPA檢測試劑盒在制備檢測豬2型圓環病毒試劑中的用途。