[發明專利]一種定點突變創制糯性玉米種質的方法及其應用有效
| 申請號： | 201610060095.5 | 申請日： | 2016-01-28 |
| 公開（公告）號： | CN107012163B | 公開（公告）日： | 2019-09-24 |
| 發明（設計）人： | 謝傳曉;祁顯濤;劉昌林;劉方;劉文國;路明 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院作物科學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢;何葉喧 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 定點 突變 創制 玉米 種質 方法 及其 應用 | ||
1.培育糯性玉米的方法，包括向目的玉米中導入玉米基因組編輯的載體，得到糯性玉米；所述玉米基因組編輯的載體含有sgRNA編碼基因；
所述sgRNA在玉米中識別的靶標DNA為編碼Waxy1蛋白的DNA片段，所述Waxy1蛋白為a1)：a1)的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；
所述玉米基因組編輯的載體還含有Cas9蛋白的編碼基因和RNA聚合酶Ⅲ識別的啟動子；所述RNA聚合酶Ⅲ識別的啟動子啟動所述sgRNA編碼基因的轉錄；
所述sgRNA識別的靶位點為SEQ ID No.2所示的DNA分子。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述sgRNA編碼基因是SEQ ID No.3的第10087-10191位所示的DNA分子。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述RNA聚合酶Ⅲ識別的啟動子為啟動子ZmPolⅢca99，所述啟動子ZmPolⅢca99是下述b1所示的DNA分子：b1)SEQ ID No.4所示的DNA分子；
所述Cas9蛋白的編碼基因是下述c1所示的DNA分子：c1)SEQ ID No.3自5’末端起第12309-16409位所示的DNA分子。
4.一種玉米基因組編輯的載體，含有Cas9蛋白的編碼基因、sgRNA編碼基因和RNA聚合酶Ⅲ識別的啟動子；所述RNA聚合酶Ⅲ識別的啟動子啟動所述sgRNA編碼基因的轉錄；
所述sgRNA在玉米中識別的靶標DNA為編碼Waxy1蛋白的DNA片段，所述Waxy1蛋白為a1)：a1)氨基酸序列是SEQ ID No.5所示的蛋白質；所述sgRNA識別的靶位點為SEQ ID No.2所示的DNA分子。
5.根據權利要求4所述的載體，其特征在于：所述sgRNA編碼基因是SEQ ID No.3的第10087-10191位所示的DNA分子。
6.根據權利要求4所述的載體，其特征在于：所述RNA聚合酶Ⅲ識別的啟動子為啟動子ZmPolⅢca99，所述啟動子ZmPolⅢca99是下述b1)所示的DNA分子：b1)SEQ ID No.4所示的DNA分子；
所述Cas9蛋白的編碼基因是下述c1所示的DNA分子：c1)SEQ ID No.3自5’末端起第12309-16409位所示的DNA分子。
7.權利要求4至6中任一所述的載體在培育糯性玉米和/或提高玉米籽粒中支鏈淀粉含量中的應用。
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