[發明專利]一種鹿角靈芝菌液發酵培養方法

有效

• 申請號: 201610058479.3
• 申請日: 2016-01-28
• 公開（公告）號: CN105586273B
• 公開（公告）日: 2018-07-03
• 發明（設計）人: 陳蕾蕾;趙雙枝;徐慧;周慶新;辛雪;王易芬;王未名;劉孝永
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院農產品研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/04;C12P33/00;A61K36/074;A61P35/00;C12R1/645
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 徐槐

本發明涉及一種鹿角靈芝菌液發酵培養方法，步驟包括，(1)母種擴增，無菌條件下剖取小塊鹿角靈芝菌的母鐘，移接到斜面培養基上，加塞，至恒溫培養箱內，25?29℃中培養7天；(2)種子液制備，在斜面培養基上取菌絲體，接種于種子液培養基中，置于搖床中25?29℃、140?160r/min培養7天；(3)發酵罐發酵，將種子液按10％接種量接種到發酵罐中，25?29℃恒溫培養80h，其中0?36小時攪拌速度90?110r/min，36?70小時攪拌速度110?130r/min，70?80小時攪拌速度90?110r/min。通過本發明發酵后，鹿角靈芝發酵液中含有較高含量的靈芝多糖和靈芝三萜類化合物。

技術領域

本發明提供了一種鹿角靈芝菌液發酵培養方法，屬于微生物領域。

背景技術

靈芝別名萬年蕈或靈芝草，屬于擔子菌綱，多孔菌目，多孔菌科，靈芝菌屬，其中的鹿角靈芝(Ganoderma amboinense)生長中會形成類似鹿角的形態，屬于靈芝中的名貴品種。近代醫學研究發現鹿角靈芝有增強免疫，促進新陳代謝，抗腫瘤，延緩衰老等作用，其關鍵活性成分是靈芝多糖和靈芝三萜。

傳統人工栽培靈芝，周期長，生產效率低，受環境影響大。而通過靈芝液體發酵技術，不但能短時間內培養出大量菌絲體，縮短生產時間，而且能獲得質量好且穩定的目標活性產物，營養和藥用價值都不低于子實體，正逐步應用于藥物，食品，美容化妝品等領域。靈芝液體發酵技術的關鍵在于尋找適合的菌株，一方面要有較高的靈芝多糖和靈芝三萜類化合物產量，一方面要能適應簡單的培養方法和廉價的培養基成分。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鹿角靈芝菌液發酵培養方法，通過本發明發酵后，鹿角靈芝發酵液中含有較高含量的靈芝多糖和靈芝三萜類化合物。

靈芝多糖具有廣泛的藥理活性，能提高機體免疫力，提高機體耐缺氧能力，消除自由基，抑制腫瘤、抗輻射，提高肝臟、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白質能力，延長壽命，靈芝多糖還具有刺激宿主非特異性抗性、免疫特異反應以及抑制移植腫瘤生理活性的特性。對心血管疾病、氣喘、過敏、神經衰弱、胃熱等有顯著效果。還具有降血壓、降血脂、降血瘀、改善血液循環、皮膚美容等作用。

靈芝三萜類化合物的藥理作用為：保肝作用；抗腫瘤作用；抗HIV-1`及HIV-1蛋白酶活性；抑制組胺釋放；抑制血管緊張素轉化酶(ACE)；抑制膽固醇合成；鎮痛作用；對血小板聚氯的影響；對蛋白金合歡酯轉移酶的抑制作用；抗氧化作用；抑制真核細胞DNA多聚酶活性。

一種鹿角靈芝菌液發酵培養方法，具體步驟如下：

(1)母種擴增

無菌條件下剖取小塊鹿角靈芝菌的母鐘，移接到斜面培養基上，加塞，至恒溫培養箱內，25-29℃中培養7天；優選的，菌株NCPSLZ1移接到斜面培養基上，27℃中培養7天；

斜面培養基：馬鈴薯洗凈，去皮，稱取200g，切成小塊，與30g麥麩，加水1000mL煮沸，保持30min，過濾，濾液中加入瓊脂20g，加熱使其全部融化后，加入葡萄糖30g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂1g，pH為7.0，分裝入試管，放入高壓滅菌鍋滅菌，溫度為121℃，時間為30min，制成試管斜面(18mm×180mm)備用；

(2)種子液制備

在斜面培養基上取1cm²的菌絲體，接種于種子液培養基中，置于搖床中25-29℃、140-160r/min培養7天；優選為，菌絲體接種于種子液培養基中，置于搖床中27℃、150r/min培養7天

種子液培養基，按質量分數計：15％土豆汁，3％麥麩，3％葡萄糖，0.2％磷酸二氫鉀，0.1％硫酸鎂，pH為7.0，培養液分裝于500mL三角瓶中，每瓶裝250mL，121℃滅菌30min，冷卻后取出備用。

(3)發酵罐發酵