[發(fā)明專利]一種利用連續(xù)培養(yǎng)過程生產牛樟芝菌體的方法

有效

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• 申請日: 2016-01-28
• 公開（公告）號: CN105580642B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設計）人: 鄧利;劉歡;王萌;曾耀銘
• 申請（專利權）人: 廈門北化生物產業(yè)研究院有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于發(fā)酵技術領域，特別涉及一種利用連續(xù)培養(yǎng)過程生產牛樟芝菌體的方法。該方法在傳統(tǒng)液體培養(yǎng)法的基礎上，通過加入一定的載體使牛樟芝菌體生長其上，待菌體生長到一定的程度，在無菌條件下刮下菌體，更換新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，以實現(xiàn)牛樟芝菌體的連續(xù)培養(yǎng)，最終利用該發(fā)明中培養(yǎng)方法，以孔徑為2?8mm的化纖網布為菌體生長層，以孔徑為2?8mm的剛性網狀材料為支撐層，單次培養(yǎng)牛樟芝可獲得菌體干重9?12g/L，連續(xù)培養(yǎng)5批后可獲得菌體干重42?50g/L。該方法是一種利用連續(xù)培養(yǎng)過程獲得牛樟芝菌體的新方法。

技術領域

本發(fā)明屬于生物發(fā)酵技術領域，具體涉及一種利用連續(xù)培養(yǎng)過程大量生產牛樟芝菌體的方法。

背景技術

樟芝，別名牛樟芝和牛樟菇，主要產于中國臺灣地區(qū)海拔450-2000米之間的山地，生于牛樟樹的心材內壁。牛樟芝含有多種生理活性物質，包括三萜類物質、雜多糖、SOD、腺苷、麥角固醇、維生素、煙堿酸、核酸凝集素、幾丁質、木質素等，這些物質都具有極高的藥用價值，具有保肝、抗腫瘤、抗氧化、免疫調節(jié)、解毒、抗炎等功效，有很好的藥用價值，是一種極具開發(fā)潛力和應用前景的藥用真菌，近年來成為國內外研究和開發(fā)的熱點。

然而，野生牛樟芝寄主專一，牛樟樹是樟芝的唯一寄主，由于牛樟樹是臺灣地區(qū)的特有樹種且數量稀少，加上野生樟芝子實體生長極其緩慢，盜伐者更是有增無減，使得野生牛樟芝子實體市場供應嚴重失衡，臺灣已經立法將牛樟樹列為國家一級保護樹種，不能隨意砍伐，因此野生樟芝子實體更難取得。

許多學者以人工培養(yǎng)方式來改善這種狀況。液體培養(yǎng)法能縮短牛樟芝的培養(yǎng)周期，已有文獻報導利用液體深層培養(yǎng)法培養(yǎng)牛樟芝，研究發(fā)現(xiàn)液體培養(yǎng)的菌體中含有5種三萜類物質，夏永軍等發(fā)現(xiàn)牛樟芝固態(tài)培養(yǎng)的菌體中活性產物的種類較液態(tài)培養(yǎng)的要豐富許多，但是由于培養(yǎng)方式的改變，也帶來不同的合成代謝途徑，使得樟芝液態(tài)培養(yǎng)中產生新的活性物質，這些活性物質同樣具有良好的生理活性，因此牛樟芝的液態(tài)培養(yǎng)同樣具有較大的研究意義。

由于液態(tài)培養(yǎng)中大量的活性物質集中于牛樟芝菌體中，因此液態(tài)培養(yǎng)的研究熱點也在于獲得牛樟芝的菌體。目前已有文獻報導了通過液態(tài)培養(yǎng)來獲得牛樟芝菌體的方法，F(xiàn)an-Chiang Yang等液體培養(yǎng)牛樟芝，利用牛樟芝絲狀真菌的特性使其長成小球形態(tài)，最終通過優(yōu)化培養(yǎng)條件最終使得液態(tài)培養(yǎng)牛樟芝7天，菌體干重達21.64g/L，此結果為目前實驗室水平獲得菌體干重最高的。目前所報導的文獻中都是以此方法來實現(xiàn)牛樟芝的液態(tài)培養(yǎng)，而將牛樟芝菌體附著在載體上上生長的液態(tài)培養(yǎng)方法目前還沒有報導。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種能夠實現(xiàn)連續(xù)培養(yǎng)牛樟芝菌體的生產方法，在傳統(tǒng)液體培養(yǎng)的基礎上，利用牛樟芝絲狀真菌的特性，通過加入特定載體，牛樟芝菌體能夠生長其上，待菌體生長到一定程度后，無菌條件下刮下載體上的菌體，并加入新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，以此 繼續(xù)獲得新的菌體，實現(xiàn)牛樟芝菌體的連續(xù)培養(yǎng)，大大縮短了牛樟芝的培養(yǎng)時間，獲取了更多的牛樟芝菌體。本發(fā)明為了實現(xiàn)上述目的采取的技術方案如下：

一種通過連續(xù)培養(yǎng)生產牛樟芝菌體的方法，包括如下步驟：

(1)擴大培養(yǎng)：利用挖塊接種法，將牛樟芝菌種接種至新的固體培養(yǎng)基中，擴大培養(yǎng)；

(2)制備孢子懸液：無菌水洗下經擴大培養(yǎng)后的新菌落上的孢子，制備孢子懸液；

(3)制備載體：載體由菌體生長層和支撐層組成，以化纖類大孔材質為菌體生長層，以剛性網狀材質為支撐層，將菌體生長層固定在支撐層上，放入液體培養(yǎng)基中作為培養(yǎng)牛樟芝菌的載體；

(4)單次培養(yǎng)：向放置了載體的液體培養(yǎng)基中接種孢子懸液，為使菌絲體均勻分布于載體上，置于180-220rpm，25-35℃的恒溫搖床中培養(yǎng)2-4天，大量菌體均勻附著于載體上生長，無菌條件下，倒掉殘留培養(yǎng)基，加入去離子水沖洗菌體3-4次，抽濾除去去離子水，獲取菌體；