[發(fā)明專利]一種利用連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610057678.2
• 申請(qǐng)日: 2016-01-28
• 公開（公告）號(hào): CN105580642B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧?yán)?/a>;劉歡;王萌;曾耀銘
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門北化生物產(chǎn)業(yè)研究院有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14
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• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法，包括如下步驟：

(1)擴(kuò)大培養(yǎng)：利用挖塊接種法，將牛樟芝菌種接種至新的固體培養(yǎng)基中，擴(kuò)大培養(yǎng)；

(2)制備孢子懸液：無(wú)菌水洗下經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后的新菌落上的孢子，制備孢子懸液；

(3)制備載體：載體由菌體生長(zhǎng)層和支撐層組成，以化纖類大孔材質(zhì)為菌體生長(zhǎng)層，以剛性網(wǎng)狀材質(zhì)為支撐層，將菌體生長(zhǎng)層固定在支撐層上，放入液體培養(yǎng)基中作為培養(yǎng)牛樟芝菌的載體；

(4)單次培養(yǎng)：向放置了載體的液體培養(yǎng)基中接種孢子懸液，為使菌絲體均勻分布于載體上，置于180-220rpm，25-35℃的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)2-4天，大量菌體均勻附著于載體上生長(zhǎng)，無(wú)菌條件下，倒掉殘留培養(yǎng)基，加入去離子水沖洗菌體3-4次，抽濾除去去離子水，獲取菌體；

(5)連續(xù)培養(yǎng)：按上述步驟(4)方法培養(yǎng)2-4天后，無(wú)菌條件下倒掉殘留培養(yǎng)基，刮下菌體，加入無(wú)菌水沖洗菌體3-4次，倒干無(wú)菌水，加入新的滅菌后的液體培養(yǎng)基，為減小培養(yǎng)中的離心力，加速菌體生長(zhǎng)，連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程置于110-160rpm，25-35℃的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)2-4天，重復(fù)此步驟即可實(shí)現(xiàn)牛樟芝菌的連續(xù)培養(yǎng)；

(6)完成單次培養(yǎng)或連續(xù)培養(yǎng)后，獲取牛樟芝菌體，烘干，測(cè)定菌體干重。

2.如權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法，其特征在于，所述步驟(1)中固體培養(yǎng)基組成為：葡萄糖10-30g/L，蛋白胨2-5g/L，麥芽浸粉10-30g/L，瓊脂10-30g/L，避光培養(yǎng)20-25天。

3.如權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法，其特征在于，所述步驟(2)中孢子懸液中的孢子數(shù)為106-108個(gè)/mL。

4.如權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法，其特征在于，所述步驟(4)中孢子懸液的接種量為2％-6％。

5.如權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法，其特征在于，所述液體培養(yǎng)基的組成為：葡萄糖15-25g/L，蛋白胨5-15g/L，KH2PO4 0.5-1.5g/L，MgS04·7H2O0.1-0.8g/L，116℃滅菌25min。

6.如權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法，其特征在于，所述步驟(3)中菌體生長(zhǎng)層裁剪成(10-30cm)×(3-15cm)大小的條狀，所述支撐層裁剪成(15-25cm)×(3-8cm)大小的條狀。

7.如權(quán)利要求1或6所述的一種通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法，其特征在于，所述化纖類大孔材質(zhì)的孔徑為2-8mm，所述剛性網(wǎng)狀材質(zhì)的孔徑為2-8mm。

8.如權(quán)利要求7所述的一種通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法，其特征在于，所述化纖類大孔材質(zhì)為大孔滌綸材質(zhì)、大孔錦綸材質(zhì)、大孔腈綸材質(zhì)或大孔丙綸材質(zhì)中的至少一種。

9.如權(quán)利要求7所述的一種通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)牛樟芝菌體的方法，其特征在于，所述剛性網(wǎng)狀材質(zhì)為不銹鋼、鋁合金或鋅合金。