[發明專利]用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片及其制備方法

有效

• 申請號: 201610057407.7
• 申請日: 2016-01-27
• 公開（公告）號: CN105617461A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 曾憲卓;張哲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫學科技有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/38;A61L27/60;A61L27/24
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及組織工程領域，特別涉及一種用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片 及其制備方法。

背景技術

皮膚是人體與外界環境接觸的屏障，不僅起保護、分泌、代謝和感覺等 作用，而且參與免疫反應和維持機體內環境的穩定。作為人體最表露的皮膚， 其受損傷及大面積燙燒傷意外的發生率較高。早期的燒傷創面覆蓋可以抑制 細菌生長、預防感染、防止水分及電解質的丟失；自體皮膚移植是治療燒傷 的首選，但是對于大面積燒傷，自體皮膚不能滿足需求，且療程周期較長， 治療過程中，皮膚創口易出現感染；而異體皮基質膚則會引起明顯的免疫排 斥反應；而移植人造皮膚，皮下的分泌物易形成水皰，進而對人造皮膚造成 損傷，且人造皮膚較昂貴，制作工藝較復雜。因此，截至目前，嚴重創傷和 大面積燒傷患者的皮源缺乏仍然是臨床亟待解決的難題。

目前，組織工程化皮膚的研究已成為生命科學研究領域的熱點之一，而 市場上也已出現用于臨床的組織工程皮膚產品，雖有一定的臨床效果，但不 僅價格昂貴，技術操作繁瑣，有一定的技術難度且成本造價較高。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，針對現有技術中采用異體皮基質修復皮 膚燒傷創口易引起免疫排斥反應且療效效率低等缺陷，提供一種能夠避免免 疫排斥反應且修復效果較好的用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片及其制備方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：提供一種用于治療皮膚燒 傷的皮膚貼片的制備方法，包括以下步驟：

分別獲取脂肪干細胞和異體皮基質；

將所述脂肪干細胞與膠原溶液混合后接種于所述異體皮基質；

其中，所述脂肪干細胞來源于皮膚燒傷患者自體。

在本發明提供的用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片的制備方法中，所述脂肪 干細胞的終濃度為(2～4)×10⁴個/ml。

在本發明提供的用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片的制備方法中，所述膠原 溶液中，膠原的質量分數為0.1～0.3％。

在本發明提供的用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片的制備方法中，所述脂肪 干細胞的獲取過程，包括以下步驟：

無菌條件下，取所述皮膚燒傷患者的脂肪組織，剔除脂肪中肉眼可見的 血管和纖維部分，經PBS溶液清洗后，剪碎，酶解振蕩消化20～60分鐘，用 完全培養基中止消化，再置于冰浴中吹打消化10～20分鐘，過濾，去除未消 化的脂肪組織和結締組織后，對濾液進行離心，去除上層油滴，取下層脂肪 細胞，PBS清洗后，即獲得原代脂肪干細胞。

在本發明提供的用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片的制備方法中，所述脂肪 干細胞的獲取過程還包括以下步驟：

洗滌所述原代脂肪干細胞，去除紅細胞，用完全培養基重懸，然后接種 于多聚鳥氨酸包被的培養板上，培養2～6小時，移去上清液后胰酶消化，去 除未消化的成纖維細胞和內皮細胞，即獲得純化后的原代脂肪干細胞。

在本發明提供的用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片的制備方法中，所述脂肪 干細胞的獲取過程還包括以下步驟：

取純化后的原代脂肪干細胞以0.5～2×10⁵個/ml的密度接種于DMEM培 養基進行擴增培養7～10天，每隔2-3天換液一次。

在本發明提供的用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片的制備方法中，所述 DMEM培養基中添加有2～5％人血清、5～15ng/ml的ITS、50～150U/ml的鏈霉 素、50～150U/ml青霉素、5～35ng/ml的EGF和5～15ng/ml的LIF。

在本發明提供的用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片的制備方法中，所述異體 皮基質的獲取過程，包括以下步驟：

取健康豬腹部或背部皮進行脫脂脫毛處理，去掉0.2～0.6mm的表皮，制 成厚度為0.2～0.4mm的真皮層皮片，清洗后消毒20～40分鐘，反復清洗，于 消化液中消化2～4天，反復清洗皮片，然后加入非離子型表面活性劑孵育2～4 天，至細胞成分完全去除，獲得脫細胞真皮，然后分別用氯化鈉和PBS反復 沖洗，即獲得異體皮基質。

在本發明提供的用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片的制備方法中，所述消化 液中包含有質量百分數為0.10～0.40％胰蛋白酶、0.01～0.03％乙二酸乙二胺和 0.01～0.03％氫氧化鈉。

本發明還提供一種用于治療皮膚燒傷的皮膚貼片，由上述用于治療皮膚 燒傷的皮膚貼片制備方法所獲得的。