[發明專利]一種快速檢測冰鮮雞肉中ATP的方法

在審

• 申請號: 201610056527.5
• 申請日: 2016-01-27
• 公開（公告）號: CN105699346A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 常國斌;魯偉;仇玲玲;張揚;陳國宏;徐琪;袁青妍;張康寧;許盛海
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明適用于食品領域。涉及一種快速檢測冰鮮雞肉中ATP的新方法。

背景技術

ATP(adenosinetriphosphate)三磷酸腺苷，被認為是一種在所有生物體生存 和繁殖的細胞合成中必不可少的普遍能量來源，它是一種通用的能量“貨幣”。自 1929年Lohmann從糖分解代謝旺盛的肌肉中首次發現并提取ATP以來，它已被 證實在生命細胞的新陳代謝以及各種生化反應的能量供應中扮演著及其重要的 角色。然而，動物機體死亡后ATP主要來源于糖酵解，合成少，新陳代謝消耗 多，導致ATP不斷降解，直至消失。利用雞屠宰后不同時間肌肉組織中ATP含 量，可以判斷最初屠宰和加工的時間，從而鑒別雞肉產品的貨架期和新鮮程度。 目前，ATP的檢測方法可分為層析法，電泳法和光學分析法。其中，層析法中 的高效液相色譜是應用最廣泛的，但是樣品處理繁瑣，耗費時間長，而且ATP 降解速度快，用色譜法經常檢測不到目標峰，不適宜大規模、快速檢測。ATP生 物發光技術產生于20世紀70年代中期,迄今已經在細胞增殖、細胞毒性和生 物量計數等方面得到廣泛應用。近年來，很多醫療機構引入便攜式ATP熒光儀 監測物體表面、醫療器械和手皮膚上清潔度質量或細菌污染量，餐飲行業以此 監測工作環境的衛生清潔情況，酒店以此監測客房的衛生狀況，食品行業以此 監測食品生產設備及環境的衛生安全狀況，相比于傳統的平板計數，這種方法 簡單快速，便于推廣。然而這種方法一直用來檢測表面微生物的數量，且存在 變異系數大，結果不準確等問題。迄今為止，尚未發現ATP生物發光技術用于 肉組織中ATP含量的檢測，更沒有一個統一的標準方法。

發明內容

本發明的目的是快速檢測屠宰后雞肉中ATP含量，從而方便雞肉產品的貨 架期和新鮮程度。

本發明的技術方案是：將樣品經充分勻漿處理，然后離心勻漿液

取上清，利用手持式ATP熒光檢測儀讀數；再將讀數根據預先擬合的標準 曲線換算成nATP的摩爾數，繼而算出nATP。。該方法中要充分勻漿以使肉液 更為均一、細胞破碎更為徹底，避免取樣部位問題對實驗結果造成的誤差影響。 本發明具體步驟是：

(1)稱取0.5g肉，放于7ml勻質管中，按1:9的比例加4.5ml水，然后每個勻質管 中加6粒磁珠。

(2)放冰上冰浴5min，然后6000r/min勻質4次(4min)，做成勻漿液。

(3)取1ml勻漿液，12000r/min離心3min。

(4)取上清10μl，打在預先解凍的ATP檢測拭子上。

(5)按下上面的反應液，反應10s后放入手持式ATP熒光檢測儀，10s后讀RLU 數值。

(6)將讀的RLU數值乘以1000后再取Log值，然后根據擬合的標準曲線換算 成nATP的摩爾數，繼而算出nATP。

所述的標準曲線是以標準品ATP摩爾數的lg值為Y軸，ATP檢測儀檢測數 據平均數的lg值為x軸。具體是取不同梯度的ATP標準品稀釋液10μl，打在 ATP拭子棉簽上，裝上外套，擠下上面的反應液，反應10s，然后放入手持式 ATP檢測儀，10s后讀RLU數值。每個樣品可測量多次，取平均數。然后以標 準品ATP摩爾數的lg值為Y軸，ATP檢測儀檢測數據平均數的lg值為x軸作 標準曲線，得出ATP標準品的回歸方程式。

根據上述得出的ATP數據可評定冰鮮雞肉新鮮程度與分級，如表3。

采用本發明方法檢測屠宰后不同時段的肉樣，實驗結果表明，屠宰后雞肉 中ATP含量基本不斷降低，與ATP降解規律基本一致。本發明相比于其他測量肉 中ATP含量的方法更為簡單、快速、可靠，變異系數小。本發明方法可用于市場 上流通冰鮮雞肉產品的新鮮度和貨架期評定。

附圖說明

圖1是實施例一的ATP標準曲線

圖2是6個時間段胸、腿肌中ATP含量的變化趨勢圖。注：X代表胸肌，T代 表腿肌。

具體實施方式

為了更好地理解本發明，以下結合實施例對本發明進一步說明，其中涉及的具 體操作和數據不是對本發明的限制。

實施例一：

材料：冰鮮雞。

試劑：ATP二鈉鹽水合物、磷酸鹽緩沖液(1X)、滅菌水、ATP檢測拭子。

儀器：手持式ATP熒光檢測儀、Precelly24勻漿器。