[發明專利]一種基于仿生學的組織工程骨的制備方法在審
| 申請號： | 201610056304.9 | 申請日： | 2016-01-27 |
| 公開（公告）號： | CN105617462A | 公開（公告）日： | 2016-06-01 |
| 發明（設計）人： | 周益;沈建偉;關曉旭;王慧明 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | A61L27/38 | 分類號： | A61L27/38;A61L27/36;A61L27/56 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司 33200 | 代理人： | 邱啟旺 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 仿生學 組織 工程 制備 方法 | ||
1.一種基于仿生學的組織工程骨的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將P3-5代BMMSCs在多孔的生物支架材料上孵育3h；其中孵育過程中，使用的培養基 為全培養基，孵育條件為37℃、含5％CO2、飽和濕度；
(2)轉移至密閉的水套式CO2細胞培養箱，每天換液，培養21天后獲得功能性組織工程 骨；培養過程中，使用的培養基為全培養基，培養條件為于37℃、飽和濕度、5％CO2、5％O2、 95％N2。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物支架材料通過以下步驟制備得 到：
(1.1)將帶有皮質骨的骨塊，用去離子水清洗后，用38℃的30vol％過氧化氫浸泡脫脂 24h；
(1.2)去離子水沖洗后，用4℃的0.6M鹽酸浸泡脫鈣4h；
(1.3)去離子水沖洗后，于乙醇中浸泡4h以去除剩余的過氧化氫；
(1.4)在室溫下用氯仿/甲醇的混合溶液(體積比1:1)浸泡處理1h；
(1.5)用4℃的0.25vol％胰蛋白酶(一般溶劑為PBS)浸泡處理12h，再用20～30℃的 0.5vol％SDS(一般溶劑為PBS)浸泡處理4h，以脫蛋白；
(1.6)用4℃的0.6M鹽酸第二次浸泡脫鈣1h。
(1.7)去離子水沖洗后，在-38℃，10-5Pa下冷凍干燥24h；
(1.8)利用60Coγ-ray放射線照射，去除支架材料的抗原性。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物支架材料在孵育前，還用無菌的 PBS浸泡24h，然后用無FBS的L-DMEM浸泡2d，再用無菌的棉球或紗布吸除殘留的L-DMEM。
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