[發明專利]鮑曼不動桿菌聯合亞單位蛋白疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201610053758.0
• 申請日: 2016-01-27
• 公開（公告）號: CN105582531B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 潘頻華;李海濤
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: A61K39/104
• 分類號: A61K39/104;A61P31/04;C12N15/70
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明提供了一種鮑曼不動桿菌聯合亞單位蛋白疫苗及其制備方法，是由如SEQ ID No.1所示的鮑曼不動桿菌SmpA和如SEQ ID No.2所示的鮑曼不動桿菌PLD核酸序列，分別連入表達載體，分別構建SmpA和PLD重組質粒，分別誘導表達重組SmpA和PLD蛋白，再將兩種蛋白混合佐劑制備的疫苗。本發明利用免疫信息學和逆向遺傳學，分析多重耐藥鮑曼不動桿菌的外膜蛋白成分的抗原性和免疫原性，進行基因克隆，蛋白表達、純化以及免疫學研究，篩選出有效的外膜蛋白成分，并予以聯合，提高疫苗的安全性和有效性，較以往疫苗有更現實和誘人的應用前景。

技術領域

本發明屬于分子生物學和免疫學交叉領域，具體來說是一種鮑曼不動桿菌聯合亞單位蛋白疫苗及其制備方法。

背景技術

鮑曼不動桿菌存在于醫院環境并在患者多部位定植，導致引起醫院獲得性肺炎、血流感染、腹腔感染、腦膜炎、皮膚軟組織感染和泌尿系感染等。由于其強大的獲得耐藥性及克隆傳播能力，鮑曼不動桿菌已成為全球流行并呈高度耐藥的常見致病菌。在我國，鮑曼不動桿菌已經成為醫院感染最常見的病原菌之一，2013年中國CHINET細菌耐藥性監測顯示鮑曼不動桿菌檢出率為11.97％，僅次于大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，其中大多數為多重耐藥菌(對亞胺培南和美羅培南的耐藥率分別為62.8％和59.4％；對頭孢哌酮舒巴坦、米諾環素和左氧氟沙星的耐藥率分別為36.4％、41.8％和43.4％)。全耐藥鮑曼不動桿菌的出現和不斷增多已成為臨床面臨的另一重大挑戰，XDR鮑曼不動桿菌主要分布于重癥監護病房或燒傷病房，顯著增加患者住院費用，延長患者住院時間，并導致感染患者陷入無藥可用的困境。當前新的有效抗菌藥物研發嚴重滯后，新的針對性的治療手段刻不容緩。近年來，國內研究主要聚焦在監測鮑曼不動桿菌耐藥性動態變化及耐藥機制的研究，國外研究則涵蓋了耐藥機制、致病機理、耐藥變化等方面，關于疫苗的研究則包括滅活疫苗、外膜蛋白疫苗、基因重組疫苗和莢膜多糖疫苗。McConnell、Bomerger等人的研究結果表明IWC(inactivatedwhole cell滅活全菌)、OMC(outer membrane complex外膜蛋白復合物)、OMV(outermembrane vesicle外膜囊泡)免疫的小鼠均能抵抗鮑曼不動桿菌的侵襲。然而由于所含成分繁多且復雜，在生產過程中難以標準化疫苗劑量；而且其中脂多糖(內毒素)含量過高，可產生明顯的毒副作用。對應的重組蛋白疫苗諸如Bap(biofilm associated protein生物膜相關蛋白)、OmpA(outer membrane protein A外膜蛋白A)和Ata(trimericautotransporter protein三聚體自轉運蛋白)均為保守基因表達產物，具有高度同源性，并覆蓋了較大部分的鮑曼不動桿菌毒株，表現了良好的免疫效果，且成分單一、重復性好、產品批間差異小、易于控制細菌內毒素含量等優勢，但單一成分疫苗可能免疫保護不足，并易將鮑曼不動桿菌置于強大的選擇壓力下誘導細胞膜靶蛋白下調，出現免疫逃避導致疫苗最終失效。

多種革蘭陰性菌基因組中小蛋白A(small protein A，SmpA)幾乎都有同源性表達，SmpA是鮑曼不動桿菌細胞膜重要成分之一；SmpA被認為是維持細胞膜完整的重要結構，是外膜形成過程中重要的功能配件。磷脂酶D(phospholipase D，PLD)被證實在病原菌血源傳播的過程中發揮了重要的作用，同時，研究證明PLD是鮑曼不動桿菌的重要致病因子。逆向免疫學提示SmpA和PLD可以作為一個良好的蛋白疫苗靶點。此外，SmpA和PLD均可誘導機體產生免疫應答，SmpA抗體可破壞體內鮑曼不動桿菌細胞膜的完整性，PLD抗體可滅活PLD活性，減低體內鮑曼不動桿菌毒力，兩者協同作用可發揮更完善的保護作用。

發明內容

本發明的目的是提供一種鮑曼不動桿菌聯合亞單位蛋白疫苗及其制備方法。利用免疫信息學和逆向遺傳學，分析多重耐藥鮑曼不動桿菌的外膜蛋白成分的抗原性和免疫原性，進行基因克隆，蛋白表達、純化以及免疫學研究，篩選出有效的外膜蛋白成分鮑曼不動桿菌外膜蛋白small protein A(SmpA)、鮑曼不動桿菌磷脂酶D(PLD)，并予以聯合，提高疫苗的安全性和有效性，較以往疫苗有更現實和誘人的應用前景。