[發明專利]一種ACE抑制酶解液及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201610052748.5
• 申請日: 2016-01-26
• 公開（公告）號: CN105483196A
• 公開（公告）日: 2016-04-13
• 發明（設計）人: 張建華;吳秉宇;姚曉敏;錢炳俊;湯慧勤
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;A61K38/01;A61P9/12;A23L33/18
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

技術領域

本發明涉及一種酶解液，尤其涉及一種ACE抑制酶解液及其制備方法和應用。

背景技術

高血壓是世界上最為普遍也是危害性最大的疾病之一。研究發現，人體血 壓主要由腎素-血管緊張素系統和激肽釋放酶-激肽系統共同調控，而血管緊張 素轉化酶(ACE)對這兩系統都有重要影響，可導致血壓升高。因此抑制ACE 的活性，可以起到治療高血壓的功效。除了人工合成的普利類藥物，食物來源 的ACE抑制劑因其天然可食療、安全無副作用，成為研究熱點。ACE抑制劑 可從各類食物材料中通過發酵或酶解，然后通過分離純化的方式制備。

扇貝裙邊即扇貝的外套膜，作為扇貝柱加工的主要副產物，占扇貝總重(除 貝殼外)的30.0％，其營養成分與扇貝柱類似，富含蛋白質且氨基酸種類齊全， 具有很高的營養價值，但目前利用率很低，除了少數被處理為動物飼料低價出 售，大部分被當做廢棄物丟棄，導致很大的浪費和污染。

因此，本領域的技術人員致力于通過酶解、純化的方式，利用扇貝裙邊等 利用率低、商業價值小的蛋白質來源，制備ACE抑制劑。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是確定合適的酶和最優的酶解條件，利用扇貝 裙邊作原料，通過透析技術，得到具有ACE抑制效果的酶解液。

本發明公開了一種ACE抑制酶解液的制備方法，包括以下步驟：

1)將扇貝裙邊洗凈、烘干、粉碎，過篩，得到扇貝裙邊粉；

2)向磷酸鹽緩沖液中里加入扇貝裙邊粉以及α-胰凝乳蛋白酶，混勻，進行水 解反應，高溫終止水解反應，離心，取上清，得到α-胰凝乳蛋白酶酶解液；

3)向α-胰凝乳蛋白酶酶解液中加入磷酸氫二鉀溶液將pH調節至7.5，然后 添加羧肽酶A和羧肽酶B，混勻，進行水解反應，高溫終止水解反應，得到羧肽 酶A/B酶解液；

4)將羧肽酶A/B酶解液放入1000DaCE透析袋，浸沒于去離子水中透析， 小于1000Da的組分擴散至去離子水中，將帶有小于1000Da的組分的去離子水裝 入500DaCE透析袋內，浸沒于去離子水中透析，得到留在透析袋內的500-1000Da 的組分，即得到ACE抑制酶解液。

進一步地，步驟1)具體為：將扇貝裙邊用水反復清洗3次，然后置于烘箱中 65℃烘干，將烘干的扇貝裙邊粉碎，過60目篩，得到扇貝裙邊粉。

進一步地，步驟2)具體為：向60mL0.035MpH8.0磷酸鹽緩沖液中里加入 4g的扇貝裙邊粉以及24mg800U/mgα-胰凝乳蛋白酶，漩渦混勻，在37℃下水 解反應5h，高溫終止水解反應，離心，取上清，得到α-胰凝乳蛋白酶酶解液。

進一步地，步驟3)具體為：取α-胰凝乳蛋白酶酶解液9.8mL，通過加入磷 酸氫二鉀溶液將pH調節至7.5，然后添加100μL200U/mL羧肽酶A和100μL 200U/mL羧肽酶B，漩渦混勻，于45℃下水解反應8h，高溫終止水解反應，得到 羧肽酶A/B酶解液。

進一步地，步驟4)中兩次透析的時間均為10-14h，期間均換一次去離子水。

本發明所涉及的ACE抑制酶解液是通過上述制備方法制得的ACE抑制酶解 液。

尤其是，ACE抑制酶解液的半抑制濃度(IC₅₀值)為800-900μg/mL。

優選地是，ACE抑制酶解液的IC₅₀值為893μg/mL，ACE抑制酶解液中分子 的大小為500-1000Da。

進一步地，ACE抑制酶解液來自扇貝裙邊，扇貝裙邊的蛋白質含量為50-55％； 扇貝裙邊的脯氨酸含量為200-210nmol/mg，占扇貝裙邊的總蛋白質含量的 5.0-5.5％。

本發明所涉及的ACE抑制酶解液能夠應用在制備降壓藥和/或降壓食品。比如， 作為制備普利類降壓藥的原料。

其有益效果：