[發明專利]包含白喉毒素無毒突變體CRM197或其片段的融合蛋白

有效

• 申請號: 201610052268.9
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN105693865B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 李少偉;宋翠靈;楊春燕;顧穎;羅文新;夏寧邵
• 申請（專利權）人: 廈門大學;廈門萬泰滄海生物技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K39/39;A61K39/29;A61K39/145;A61P31/14;A61P31/16
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 林遠成

本發明涉及分子病毒學和免疫學領域。具體而言，本發明涉及白喉毒素無毒突變體CRM197或其片段在融合蛋白中作為分子內佐劑增強與其融合的目的蛋白(例如HEV衣殼蛋白、流感病毒M2蛋白或其免疫原性片段)的免疫原性的用途。本發明還涉及增強目的蛋白(例如HEV衣殼蛋白、流感病毒M2蛋白或其免疫原性片段)的免疫原性的方法，其包括將CRM197或其片段與目的蛋白融合表達，形成融合蛋白。本發明還涉及包含CRM197或其片段以及目的蛋白(例如HEV衣殼蛋白、流感病毒M2蛋白或其免疫原性片段)的融合蛋白，其中CRM197或其片段增強了目的蛋白的免疫原性。本發明還涉及編碼所述融合蛋白的分離的核酸，包含所述核酸的構建體和載體，以及包含所述核酸的宿主細胞。本發明還涉及所述融合蛋白的用途，其用于制備藥物組合物或疫苗。

技術領域

本發明涉及分子病毒學和免疫學領域。具體而言，本發明涉及白喉毒素無毒突變體CRM197或其片段在融合蛋白中作為分子內佐劑增強與其融合的目的蛋白(例如HEV衣殼蛋白、流感病毒M2蛋白或其免疫原性片段)的免疫原性的用途。本發明還涉及增強目的蛋白(例如HEV衣殼蛋白、流感病毒M2蛋白或其免疫原性片段)的免疫原性的方法，其包括將CRM197或其片段與目的蛋白融合表達，形成融合蛋白。本發明還涉及包含CRM197或其片段以及目的蛋白(例如HEV衣殼蛋白、流感病毒M2蛋白或其免疫原性片段)的融合蛋白，其中CRM197或其片段增強了目的蛋白的免疫原性。本發明還涉及編碼所述融合蛋白的分離的核酸，包含所述核酸的構建體和載體，以及包含所述核酸的宿主細胞。本發明還涉及所述融合蛋白的用途，其用于制備藥物組合物或疫苗。

背景技術

已對白喉毒素(diphtheria toxin，DT)進行了深入的研究。結構研究顯示，白喉毒素由三個結構域組成：N端的催化結構域C(aa 1-190，C domain)(其也稱為A片段)，中間轉膜結構域T(aa 201-384，T domain)，以及C端的受體結合位點結構域R(aa 386-535，Rdomain)(Choe S,Bennett M,Fujii G,et al.，Nature.1992.357:216～222)。利用白喉毒素的前兩個結構域與白介素2(IL-2)融合而制備的ONTAK(DAB389-IL-2)在1999年被美國FDA批準上市，用于成人皮膚T細胞淋巴瘤的治療。這證實白喉毒素的三個結構域可以進行拆分并發揮其各自的功能。

CRM197(Cross-Reacting Materials 197)是白喉毒素的一種無毒突變體(Uchida，T.，A.M,Pappenheimer，Jr.，R.Gregory，et al.,J.Biol.Chem.1973.248:3838-3844)，其與編碼DT的野生型基因相比存在單個核苷酸突變，導致第52位的氨基酸殘基由Gly變為Glu(G.Giannini，R.Rappuoli，G.Ratti et al.,Nucleic AcidsResearch.1984.12：4063-4070)。

研究表明，CRM197雖然具有與野生型DT類似的結構(即，具有上述3個結構域)，但其A片段喪失了與NAD結合的能力，不能結合EF2并因而喪失了天然DT所具有的細胞毒性，這表明第52位氨基酸殘基Gly在DT與NAD的結合中起著重要作用(K.Moyner,G.Christiansen,Acta path microbial immunolscand sect C.1984,92:17-23)。CRM197雖然喪失了細胞毒性，但其卻保留了與野生型DT相當的、極強的免疫原性，因此其常被用作蛋白載體，用于與其他半抗原交聯從而制備結合疫苗。