[發明專利]一種大花蕙蘭人工種子制作方法

有效

• 申請號: 201610051914.X
• 申請日: 2016-01-26
• 公開（公告）號: CN105557527B
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 王廣東;劉昕岑;易夢;張燕;張琛
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 蔣真

1.一種大花蕙蘭人工種子制作方法，其特征包括以下方面：

a）類原球莖誘導：以大花蕙蘭無菌苗莖尖為材料接種于類原球莖誘導培養基生長，誘導形成類原球莖；

b）類原球莖增殖：步驟a）得到的類原球莖在固體增殖培養基生長20-30天后，轉移至液體培養基進行增殖生長，增殖之后的大花蕙蘭類原球莖用于人工種子制作和包埋；

c）大花蕙蘭人工種子制作與萌發：將步驟b）得到的類原球莖切分成單個類原球莖，采用海藻酸鈉溶液和CaCl₂包埋，凝固形成的人工種子經過無菌和溫室萌發；

所述步驟a）中類原球莖誘導為將無菌苗莖尖接種到1/2MS+NAA0.5-2.0 mg?L^-1+椰乳50- 150ml?L^-1+蔗糖30-40g?L^-1＋瓊脂5.5-7.0 g?L^-1+活性炭1.0 g?L^-1的培養基上誘導形成類原球莖；

所述步驟b）中大花蕙蘭類原球莖的固體增殖的步驟為：挑選生長狀態接近的類原球莖，在無菌條件下稱重，接種到1/2MS固體培養基添加NAA 1.0-2.5 mg?L^-1+6-BA 0.5-1.0mg?L^-1生長20-30天，然后轉移至液體培養基，原球莖的液體增殖的步驟為：選用容積為100-500ml的三角瓶為培養容器，將類原球莖接種到1/2MS+NAA2.0-2.5mg L^-1+6-BA 0.5-1.0mg?L^-1液體培養基中，每瓶接種2.0g，液體生長20天的類原球莖用于人工種子包埋；

所述步驟c）大花蕙蘭人工種子制作與萌發包括以下步驟：

將海藻酸鈉溶解于1/2MS培養液中，配制成質量濃度為2%-3%的海藻酸鈉溶液，高溫高壓滅菌；在無菌條件下，選擇飽滿硬脆的綠色類原球莖，分離直徑5.0mm左右的顆粒置于海藻酸鈉溶液中，然后用滴管吸取含有類原球莖的溶液滴入作為凝聚劑的2%CaCl₂溶液中，形成直徑8.0mm左右的凝膠顆粒，20min后取出，制作成類原球莖人工種子；以無菌水沖洗三次，平置于純瓊脂培養基的培養皿中；此外，人工種皮中需添加NAA0.5-2.0mg?L^-1+6-BA0.5-1.0 mg?L^-1；

挑取未萌發的類原球莖，將類原球莖接種到鋪有干燥濾紙的培養皿或鋪有以無菌水濕潤的濾紙的培養皿中，恒溫培養20天；以不加有機元素的1/2MS＋NAA0.5-2.0mg?L^-1＋6-BA1.0-2.0 mg?L^-1配置2%的海藻酸鈉溶液，包埋上述類原球莖，得到的人工種子置于純瓊脂培養基的培養皿中，在培養室中培養，萌發率達到90％以上。