[發明專利]一種大花蕙蘭人工種子制作方法

有效

• 申請號: 201610051914.X
• 申請日: 2016-01-26
• 公開（公告）號: CN105557527B
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 王廣東;劉昕岑;易夢;張燕;張琛
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 蔣真

一種大花蕙蘭人工種子制作方法，包括以下步驟：a)類原球莖誘導：以大花蕙蘭無菌苗莖尖為材料接種于類原球莖誘導培養基生長，誘導形成類原球莖；b)原球莖增殖：步驟a)得到的類原球莖在固體增殖培養基生長20?30天后，轉移至液體培養基進行增殖生長20?30天，增殖之后的大花蕙蘭類原球莖用于人工種子制作和包埋；c)大花蕙蘭人工種子制作與萌發：將步驟b)得到的類原球莖切分成單個類原球莖，采用海藻酸鈉溶液和CaCl₂包埋，凝固形成的人工種子經過無菌和溫室萌發。本發明方法可以用于不同大花蕙蘭品種的人工種子的制作，溫室播種萌發后形成的種苗可以代替常規組培苗進行大花蕙蘭種苗的生產，降低大花蕙蘭種苗生產成本。

技術領域

本發明屬于植物組織培養領域，具體涉及一種大花蕙蘭人工種子制作方法。

背景技術

大花蕙蘭(Cymbidium Hybrid)為蘭科蘭屬植物中的部分大花型附生種的雜交種，是世界上銷量最高的洋蘭之一。大花蕙蘭花色鮮艷、花期長，觀賞性極高，深受世界蘭花愛好者的歡迎。由于大花蕙蘭多為雜交品種，種子自然結實率相當低，且種子發育不完全，沒有胚乳，常規情況下極難萌發，需要采用無菌播種技術才能萌發，后代萌發種子多出現性狀分離，加之大花蕙蘭分株能力弱，因而繁殖困難，繁殖速度慢，遠遠不能滿足商品化生產的要求，而組織培養技術已成為大花蕙蘭規模化繁殖與生產的重要手段(陳璋，2004)。國內研究大花蕙蘭快速繁殖體系的報道雖多，但多集中在無菌苗增殖等方面，而采用類原球莖液體震蕩培養對大花蕙蘭增殖和人工種子包埋尚未見報道。

大花蕙蘭常規組培苗工廠化生產，通常采用不定芽增殖和生根培養技術，操作步驟繁瑣，生長周期長，機械化程度低，費工費時，能耗高，生產成本較高。

發明內容

本發明的目的是提供一種大花蕙蘭人工種子制作方法，以克服現有技術的上述缺陷。

本發明的技術方案如下：

一種大花蕙蘭人工種子制作方法，包括以下步驟：

a)類原球莖誘導：以大花蕙蘭無菌苗莖尖為材料接種于類原球莖誘導培養基生長，誘導形成類原球莖；

b)原球莖增殖：步驟a)得到的類原球莖在固體增殖培養基生長20-30天后，轉移至液體培養基進行增殖生長20-30天，增殖之后的大花蕙蘭類原球莖用于人工種子制作和包埋；

c)大花蕙蘭人工種子制作與萌發：將步驟b)得到的類原球莖切分成單個類原球莖，采用海藻酸鈉溶液和CaCl₂包埋，凝固形成的人工種子經過無菌和溫室萌發。

所述步驟a)中類原球莖誘導為將無菌苗莖尖接種到1/2MS+NAA0.5-2.0mg·L^-1+椰乳50-150ml·L^-1+蔗糖30-40g·L^-1+瓊脂5.5-7.0g·L^-1+活性炭1.0g·L^-1的培養基上誘導形成類原球莖。

所述步驟b)中大花蕙蘭類原球莖的固體增殖的步驟為：挑選生長狀態接近的類原球莖，接種到1/2MS固體培養基添加NAA 1.0-2.5mg·L^-1+6-BA 0.5-1.0mg·L^-1生長20-30天；

所述步驟b)中大花蕙蘭類原球莖的液體增殖的步驟為：選用容積為100-500ml的三角瓶為培養容器，將類原球莖接種到1/2MS+NAA2.0-2.5mg L^-1+6-BA 0.5-1.0mg·L^-1液體培養基中，每瓶接種2.0g，培養時間為20-30天，液體生長20天的類原球莖用于人工種子包埋。

所述步驟c)大花蕙蘭人工種子制作與萌發包括以下步驟：