[發明專利]一種改造的sgRNA及染色體標記應用

在審

• 申請號: 201610051134.5
• 申請日: 2016-01-21
• 公開（公告）號: CN105755040A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 邵世鵬;孫育杰
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/65;C12N15/113
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于改造sgRNA的染色體標記方法，其特征在于，在sgRNA的環2和/或環4的位置，插入RNA適配子，通過相應的可以識別適配子的蛋白質，將熒光蛋白連接到可以識別適配子的蛋白質上，從而將熒光蛋白招募到特定的染色體基因位點上。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述sgRNA的L00P4的位置插入數量2-6個堿基，優選插入4個堿基；并在相應配對位置做出適應性修改。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述sgRNA的起始部分的四個U中的其中一個換成A，并在相應配對位置做出適應性的修改。

4.根據前面任一項權利要求所述的方法，其特征在于，所述的RNA適配子是MS2或者PP7或者Spinach或者COM或者λN等，可以識別MS2的蛋白質是MCP，可以識別PP7的蛋白質是PCP。

5.根據前面任一項權利要求所述的方法，其特征在于，不同適配子識別蛋白上連接不同的熒光蛋白，從而實現對特定的基因位點進行多色標記。

6.根據前面任一項權利要求所述的方法，其特征在于，還包括將改造后的sgRNA和dCas9蛋白以及靶序列DNA形成復合物。

7.根據前面任一項權利要求所述的方法，其特征在于，改造sgRNA的染色體標記方法可以用于高度重復位點的雙色標記與長時間追蹤、單基因位點標記、細胞分裂過程中染色體動態行為的觀察、sgRNA定位等方面。

8.一種改造的sgRNA，其特征在于，由以下步驟制備：

在sgRNA的環2和/或環4的位置，插入RNA適配子，通過相應的可以識別適配子的蛋白質，將熒光蛋白和可以識別適配子的蛋白質連接起來。

9.根據權利要求8所述的一種改造的sgRNA，其特征在于，所述改造的sgRNA可用于活細胞染色、高度重復位點的雙色標記與長時間追蹤、單基因位點標記、細胞分裂過程中染色體動態行為的觀察、sgRNA定位等方面。

10.根據權利要求8所述的一種改造的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的L00P4的位置插入數量2-6個堿基，優選插入4個堿基；并在相應配對位置做出適應性修改。

11.根據權利要求8或10所述的一種改造的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的起始部分的四個U中的其中一個換成A，并在相應配對位置做出適應性的修改。

12.根據權利要求8-11任一項所述的一種改造的sgRNA，其特征在于，所述的RNA適配子是MS2或者PP7或者Spinach或者COM或者λN等，可以識別MS2的蛋白質是MCP，可以識別PP7的蛋白質是PCP。

13.根據權利要求8-12任一項所述的一種改造的sgRNA，其特征在于，不同適配子識別蛋白上連接不同的熒光蛋白，從而實現對特定的基因位點進行多色標記。

14.根據權利要求8-13任一項所述的一種改造的sgRNA，其特征在于，還包括將改造后的sgRNA和dCas9蛋白以及靶序列DNA形成復合物。