[發明專利]紫變青霉QL-9204及在轉化根皮苷制備根皮素中的應用

有效

• 申請號: 201610051127.5
• 申請日: 2016-01-25
• 公開（公告）號: CN105543108B
• 公開（公告）日: 2019-03-05
• 發明（設計）人: 梅建鳳;李靚;金航;應國清;王鴻;易喻
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/26;C12R1/80
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

本發明公開了一種紫變青霉QL?9204及在轉化根皮苷制備根皮素中的應用；本發明紫變青霉QL?9204無毒無害，使用安全的菌種；紫變青霉QL?9204生長快、抗雜菌能力強、容易培養，批次穩定；發酵培養基成分簡單，市場價格低，從而生產成本較低；本發明將底物根皮苷直接投入到粗酶液中轉化，免去了酶的分離純化步驟，工藝簡單，易于工業化應用；根皮素的轉化得率高，最高可達92.5％，且具有副產物少，產物容易提取等優點。

(一)技術領域

本發明涉及一種根皮素的制備方法，特別涉及一株紫變青霉(Penicilliumpurpurogenum)QL-9204，以及該菌株在轉化根皮苷制備根皮素領域中的應用。

(二)背景技術

根皮素(phloretin)，又名三羥苯酚丙酮，CAS號60-82-2，屬于二氫查爾酮化合物。化學結構為3-(4-羥基苯基)-1-(2、4、6-三羥基苯基)-1-丙酮，分子式為C₁₅H₁₄O₅，分子量為274.27，純品為粉紅色，易溶于甲醇、乙醇和丙酮，幾乎不溶于水，可溶于堿性溶液。根皮素具有很好的抗氧化、抗自由基作用，能抑制黑色素細胞活性，對色斑有很好的淡化作用；不僅如此，根皮素還具有很好的抗炎和免疫抑制作用；最新研究表明根皮素還具有抗腫瘤以及抗癌活性。

根皮素自然存在的形態多是以糖苷形式存在，即根皮苷(phlorizin，CAS號60-81-1)。根皮苷廣泛存在于蘋果、荔枝等水果中，主要集中在這些植物中的根莖或根皮中。生產根皮素的方法可以采用有機化學方法合成，也可以通過天然的根皮苷經酸堿水解或酶解法獲得。目前，有專利報道采用酸堿水解或酶解的方法轉化根皮苷為根皮素，但這些技術的應用有一定的限制，如采用酸堿水解法，雖然具有成本低的優勢，但存在酸堿殘留、轉化專一性差和產品需脫色等不足；采用酶解法則需要商品水解酶，且酶不能回收重復利用，導致工藝成本過高。

微生物有著非常強大的酶系和分解轉化物質的能力，如果能篩選出轉化專一性強的微生物，發酵產生的相應的糖苷酶，用濾除菌體的粗酶液作為轉化體系，根皮苷在粗酶液中糖苷酶的作用下轉化為根皮素，可以克服酸堿水解和酶解法的不足，因此具有反應條件溫和、專一性強、生產成本低和環境友好等優點。

(三)發明內容

本發明目的是提供一株產生糖苷酶的微生物菌株—紫變青霉(Penicilliumpurpurogenum)QL-9204，及其在轉化根皮苷制備根皮素中的應用，較好地克服現有酸堿水解法和酶解法制備中專一性差和轉化得率低的問題，本工藝具有成本低、流程簡單、轉化得率高和轉化副產物少等優點。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一株新菌株—紫變青霉(Penicillium purpurogenum)QL-9204，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號：CCTCC No：M 2015781，保藏日期2015年12月25日，地址：中國，武漢，武漢大學；郵編：430072。

本發明所述紫變青霉QL-9204，是從以蘋果皮為微生物來源的富集培養物中分離和篩選得到的優良菌株。所述紫變青霉QL-9204的菌落特征如下：接種在馬鈴薯培養基(PDA)瓊脂平板上，28℃培養2天后，平板表面長出白色絮狀的菌絲體，氣生菌絲長度在1～2mm，菌落邊緣呈鋸齒狀不整齊，繼續培養3天后，菌落正面逐漸變灰綠色，背面逐漸變為紫紅色。顯微鏡下觀察菌絲孢子絲呈掃帚狀，1～2層小梗，分生孢子串呈不分枝的鏈狀，橢圓形，淡黃色，表面粗糙。

所述紫變青霉QL-9204的18s rDNA的部分核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

SEQ ID NO:1：