[發明專利]has-miR-29b-3p的檢測在審
| 申請號： | 201610048023.9 | 申請日： | 2016-01-25 |
| 公開（公告）號： | CN105567826A | 公開（公告）日： | 2016-05-11 |
| 發明（設計）人： | 杜鴻;王敏;張海方;謝小芳;李愛青;周惠琴 | 申請（專利權）人： | 蘇州大學附屬第二醫院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103 | 代理人： | 范晴 |
| 地址： | 215004 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | has mir 29 檢測 | ||
1.一種檢測has-miR-29b-3p的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括用于特異性擴增 has-miR-29b-3p的特異性引物對，所述引物為具有SEQIDNo：1的連續核苷酸序列和具有 SEQIDNo：2的連續核苷酸序列；
所述試劑盒中還包括RNA逆轉錄引物，其序列為SEQIDNo：3。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括與引物序列構成PCR 反應體系的Pfu緩沖液、dNTPs、MgSO4、PfuDNA聚合酶、模板DNA、熒光染料；所述PCR反應體 系的終濃度組成為：
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光染料可選自DNA飽和性染料包 括EvaGreen染料、PLUS染料、ResoLight染料、SYTO9染料、SYBRgreen染料；所 述dNTP混合液包括10mMdATP、10mMdCTP、10mMdTTP、10mMdGTP的混合液。
4.一種權利要求1所述的試劑盒的使用方法，包括如下步驟：
(1)血清總RNA的提取：包括取血樣離心后，取上清，加入TRIzolLSReagent試劑和冰 醋酸，劇烈振蕩混勻進行勻漿；孵育后加入氯仿抽提，取水相加入異丙醇沉淀RNA，離心沉淀 RNA，去除上清液后加入乙醇清洗沉淀RNA，最后空氣干燥，加入無RNA酶的水溶解RNA備用；
(2)逆轉錄：在SEQIDNo：3的反轉錄酶的作用下及RNA酶抑制劑存在的條件下反應，反 應條件16℃30min,42℃40min,85℃5min,最后在冰上待用或-20℃保存；
(3)熒光定量PCR(RT-PCR):使用SEQIDNo：1的引物和SEQIDNo：2的引物進行熒光定 量PCR反應，
(4)建立標準曲線，按絕對定量方法對結果進行分析。
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