[發明專利]一種檢測藤壺幼蟲早期附著程度的方法

在審

• 申請號: 201610047648.3
• 申請日: 2016-01-25
• 公開（公告）號: CN105506144A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 高珊;孫源;張治洲
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學（威海）
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

1.一種檢測藤壺幼蟲早期附著程度的方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：

⑴藤壺特異性引物的設計；

⑵污損早期，肉眼可見附著藤壺之前，海水污損樣本的采集和基因組提取；

⑶利用藤壺特異性引物對上述基因組樣本進行PCR擴增來測定藤壺幼蟲的附著。

2.上述權利要求1中所述的方法，其特征在于：藤壺特異性引物設計方法如下：比較 主要海洋污損真核生物的18S核糖體基因序列，找出來藤壺的特異性單核苷酸多態性位點。 該位點作為引物的3’最末端位置使用。引物的3’倒數第二位的堿基設計原則是，它與靶 序列之間沒有錯配或形成一個錯配(弱錯配：A-C,T-G；或者是中等強度的錯配：A-A，C-C， G-G)，與非靶序列也形成一個錯配(強錯配：T-T，T-C,A-G；或者是中等強度的錯配：A-A， C-C，G-G)。這樣一來，引物與靶序列完全配對或只有一個3’倒數第二位的錯配，一般不 影響擴增效果，而與非靶序列有兩個3’最末端的連續兩個錯配，一般導致擴增失敗。如此 可以獲得藤壺特異性引物。

3.依據上述權利要求1所述的所述的方法，其特征在于藤壺特異性引物之一為AmpR1： 5’-ATGCTTTCGCAGTAGTTCGTTG-3’，該引物與通用引物F566：5’-GGCATCACAGACCTG TTATTGC-3’一起使用可以完成早期污損樣品中藤壺幼蟲存在與否的測定判斷。