[發(fā)明專(zhuān)利]醫(yī)藥級(jí)桿菌肽及其制備裝置

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610046423.6
• 申請(qǐng)日: 2016-01-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105504020B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-12-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘆琦;陳曉靜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 雅賽利(臺(tái)州)制藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K7/08
• 分類(lèi)號(hào): C07K7/08;C07K14/32;C07K1/34;C07K1/18;C12M1/00
• 代理公司: 11508 北京維正專(zhuān)利代理有限公司
• 代理人: 林樂(lè)飛

本發(fā)明的目的在于提供一種適用于多種原料來(lái)源的醫(yī)藥級(jí)桿菌肽及其制備裝置。該醫(yī)藥級(jí)桿菌肽的制備方法包括如下步驟：取桿菌肽發(fā)酵液進(jìn)行酸化，經(jīng)陶瓷膜過(guò)濾；取陶瓷膜透出液經(jīng)陽(yáng)離子交換層析，收集陽(yáng)離子交換層析上柱液；將陽(yáng)離子交換層析上柱液經(jīng)陰離子交換，收集陰離子交換上柱液；將陰離子交換上柱液經(jīng)金屬螯合，收集金屬螯合柱液；將金屬螯合柱液經(jīng)納濾處理，得到末次納濾產(chǎn)品液；將末次納濾產(chǎn)品液溶解、過(guò)濾并取其濾液干燥、粉碎，即得；其中，起始物質(zhì)桿菌肽發(fā)酵液可用低含量的桿菌肽溶液代替且末次納濾處理的納濾膜的截留分子量為300Da?500Da。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種桿菌肽，更具體地說(shuō)，它涉及一種醫(yī)藥級(jí)桿菌肽及其制備裝置。

背景技術(shù)

桿菌肽(Bacitracin)是一種有效的窄譜多肽抗菌素，其抗菌譜與青霉素類(lèi)似，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、部分革蘭氏陰性菌、螺旋體、放線菌有效。

桿菌肽(Bacitracin)，又名枯草菌素、枯草菌肽，其為白色粉末，在水、乙醇、吡啶中易溶，酸性或中性的桿菌肽水溶液相對(duì)較穩(wěn)定，pH值5-7的溶液可穩(wěn)定4周，在pH大于9的溶液中存在時(shí)，室溫下可迅速降解。研究發(fā)現(xiàn)，桿菌肽為多種氨基酸結(jié)合而成的不穩(wěn)定的多肽，含A、A1、B、C…G等多種組分，且其以桿菌肽A為主。目前公認(rèn)桿菌肽A、B1和B2組分最具有生物活性，其含有約桿菌肽混合物95％的生物活性。桿菌肽A的分子式為C₆₆H₁₀₃N₁₇O₁₆S，其為一個(gè)十二肽，含有一個(gè)七元環(huán)。桿菌肽A含有一個(gè)由帶-SH異亮氨酸的羧酸和半胖氨酸的-NH₂縮合形成的不尋常的噻唑鄰環(huán)，一個(gè)在賴(lài)氨酸的ε-NH₂側(cè)鏈和天門(mén)酰胺的C-端之間連接形成的環(huán)狀七肽結(jié)構(gòu)，以及四個(gè)D-氨基酸包括D-谷氨酸、D-鳥(niǎo)氨酸、D-苯丙氨酸和D-天門(mén)冬氨酸，其結(jié)構(gòu)式如式I所示：

目前，桿菌肽的工業(yè)化生產(chǎn)主要通過(guò)微生物發(fā)酵法制備，其以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和B類(lèi)地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液為原料來(lái)提取分離制得。國(guó)內(nèi)目前的桿菌肽產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，且其以飼料級(jí)為主，其與中國(guó)藥典中對(duì)藥用級(jí)桿菌肽的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相比仍具有相當(dāng)?shù)牟罹唷Ｆ渲校袊?guó)藥典對(duì)藥用的桿菌肽的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

表1 中國(guó)藥典(2015)中桿菌肽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

美國(guó)專(zhuān)利US2498165公開(kāi)了一種利用有機(jī)溶劑萃取桿菌肽的方法，這種方法利用水、正丁酯之間的不互溶性、桿菌肽及其雜質(zhì)在不同溶劑中的溶解度差異來(lái)萃取桿菌肽，這種方法需要使用大量的溶劑且在成品中的溶劑殘留難除去，且其收率低。

公開(kāi)號(hào)為CN102153633A的中國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)了一種提取分離桿菌肽的方法，其包括

(1)超濾提取分離桿菌肽濃縮液：桿菌肽發(fā)酵液經(jīng)過(guò)酸化，震動(dòng)篩過(guò)濾或離心去除菌體后，超濾去除菌體和大分子雜質(zhì)、樹(shù)脂吸附脫除無(wú)機(jī)鹽、真空蒸發(fā)濃縮得到桿菌肽濃縮液；

(2)桿菌肽濃縮液制備桿菌肽結(jié)晶體：桿菌肽濃縮液經(jīng)過(guò)溶劑萃取、脫色、納濾、結(jié)晶分離、干燥、粉碎、篩分、檢驗(yàn)、成品包裝等生產(chǎn)得到合格的桿菌肽產(chǎn)品。研究發(fā)現(xiàn)，這種方法雖然在一定程度上可以提高桿菌肽的純度和含量，但其受原料的來(lái)源影響較大，即其只能處理部分特定的發(fā)酵液，在工業(yè)化應(yīng)用上存在較大的局限性。

因此，開(kāi)發(fā)出一種適用于多種原料來(lái)源的藥用級(jí)的桿菌肽具有較大的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種適用于多種原料來(lái)源的醫(yī)藥級(jí)桿菌肽，其制備方法包括如下步驟：

S1，取桿菌肽發(fā)酵液進(jìn)行酸化，經(jīng)陶瓷膜過(guò)濾，得到陶瓷膜透出液；