[發明專利]一種人可溶性ICOSL ELISA試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201610045558.0
• 申請日: 2016-01-25
• 公開（公告）號: CN105586318B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發明（設計）人: 張學光;劉翠平;胡筱涵
• 申請（專利權）人: 蘇州大學附屬第一醫院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/28;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 32200 南京經緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 曹毅

本發明公開了一種人可溶性ICOSL ELISA試劑盒及其檢測方法。具體而言，本發明的ELISA試劑盒包括一對抗人可溶性ICOSL單克隆抗體2B4和20B10，其分別由雜交瘤細胞株2B4（保藏編號為CGMCC NO:11291）和20B10（保藏編號為CGMCC NO:11187）產生，并分別用作改良雙抗體夾心ELISA方法中的檢測抗體和包被抗體。本發明利用該試劑盒成功完成了人可溶性sICOSL的定量檢測，不僅具有較高的檢測靈敏度，而且具有較好的檢測特異性，開發及應用前景良好。

技術領域

本發明屬于免疫分析技術領域，涉及一種定量檢測人可溶性ICOSL的ELISA試劑盒，利用該試劑盒進行定量檢測的方法。

背景技術

目前已知的許多受體-配體相互作用都參與誘導、建立和調節抗原特異性免疫反應，其中T細胞的活化需要雙信號，抗原肽-MHC分子復合物與T細胞受體（TCR）的結合提供了第一信號，而第二信號則來源于抗原呈遞細胞（APC）和T細胞表面共刺激分子（costimulatory molecule）的相互作用，缺乏第二信號將導致T細胞失能或程序性死亡。由此可見，共刺激信號是T細胞克隆擴增、分化和發揮生物效應所必不可少的。

近年來，隨著分子生物學技術被廣泛應用于免疫學研究，共刺激分子被不斷發現。這些共刺激分子按其結構的不同可分為兩類：一類是腫瘤壞死因子/腫瘤壞死因子受體（TNF/TNFR）超家族，包括CD40/CD40L、CD27/CD27L、CD30/CD30L、4-1BB/4-1BBL、OX40/OX40L、RANK/RANKL和Fas/FasL等；另一類是免疫球蛋白（Ig）超家族，包括CD28/CTLA4-B7、LAF1-ICAM-1/ICAM-2/ICAM-3、ICOS-ICOSL、CD2-LFA-3等。這些共刺激分子以受體和配體相互作用的方式傳導信號。受體和配體一般表達在不同的細胞表面，通常一個為持續性表達，一個是誘導性表達。在免疫應答的不同階段，這些分子以各自獨特而又相關聯的方式參與信號傳導，共同調控機體的免疫應答。

可誘導共刺激分子（inducible costimulator，ICOS）是1999年由Hutloff等人發現的CD28家族的新成員，ICOS是由兩個亞單位構成的同源二聚體I型跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族。ICOS的胞漿區含有YMFM基序，能與PI3K激酶結合，胞外區含有一個V樣Ig功能區，其中的FDPPF基序是與相應配體ICOSL結合的結構，ICOS主要表達于濾泡輔助性T細胞（Tfollicular helper，Tfh）、活化T細胞和效應/記憶性T細胞上。ICOS的配體ICOSL（又稱為hB7RP-1，B7-H2，hLICOS）是由309個氨基酸組成的I型跨膜糖蛋白，約63~72 kDa，胞外區包含IgV、IgC區，胞內段則根據不同的生理環境及細胞自身的狀態而剪接形成不同的異構體，其中的4個半胱氨酸及IgV區80位的酪氨酸都是保守位點，不僅是B7家族的標志性位點，而且對于免疫球蛋白樣結構的形成也十分重要。ICOSL主要表達在B細胞（例如淋巴結的皮質區和淋巴濾泡、脾的邊緣帶，此外在扁桃體B細胞的表面也有低水平表達）、單核細胞、部分樹突狀細胞和巨噬細胞上，提示ICOSL在B細胞參與的體液免疫應答中可能發揮著重要作用。除在淋巴組織表達以外，ICOSL在腎、心、膀胱和腦等非淋巴組織也有表達，表明該分子可能具有多方面的功能。多種因素可調控ICOSL的表達，外周血中未經刺激的B細胞、單核細胞表面低水平表達ICOSL，經IFN-γ、TNF-α、LPS刺激后，ICOSL的表達迅速上調。