[發明專利]基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒

有效

• 申請號: 201610045465.8
• 申請日: 2016-01-22
• 公開（公告）號: CN106996976B
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 劉志明;吳詩揚;廖傳榮
• 申請（專利權）人: 益善生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

1.一種基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，包括有：

(1)針對不同CTCs標志蛋白質的捕獲抗體復合物：每種捕獲抗體復合物由與對應的標志蛋白質特異性結合的捕獲抗體和適配體通過可剪切材料連接而成，所述可剪切材料為具有2個或2個以上的限制性內切酶位點的回文結構的脫氧核糖核苷酸雙鏈；所述適配體能與相應的特異性結合物結合；

(2)表面偶聯有細胞捕獲組件的微流控芯片，所述細胞捕獲組件由微柱構成，所述微柱的一端與微流控芯片相連，另一端修飾有特異性結合物，所述特異性結合物能與上述相應的適配體特異性結合。

2.根據權利要求1所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，所述適配體選自：生物素、地高辛、熒光素或單鏈脫氧核糖核苷酸中的一種；所述特異性結合物為相應的鏈霉親和素、抗地高辛抗體、抗熒光素抗體或互補單鏈脫氧核糖核苷酸中的一種。

3.根據權利要求1所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，針對每種CTCs標志蛋白質分別有相應的捕獲抗體復合物：

所述CTCs標志蛋白質為選自EpCAM、E-cadherin、KTR18和KTR19中的至少一種作為上皮細胞類型標志蛋白質，和/或選自N-cadherin、vimentin、fibronectin、ZEB1和SNAI1中的至少一種作為間質細胞類型標志蛋白質；

所述捕獲抗體復合物，針對每種CTCs標志蛋白質，其捕獲抗體復合物分別由相應的CTCs標志蛋白質捕獲抗體構成；不同的CTCs，其適配體、可剪切材料相同。

4.根據權利要求1所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，還包括有：針對每種CTCs標志蛋白質的標記抗體，所述標記抗體能與相應捕獲抗體發生特異性結合反應，且修飾有熒光基團，不同CTCs細胞類型，其標記抗體熒光基團互不相同。

5.根據權利要求4所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，還包括：針對白細胞標志蛋白質的磁珠抗體，所述磁珠抗體為針對白細胞標志蛋白質的標記抗體與磁珠結合而成；所述磁珠抗體能與白細胞標志蛋白質發生特異性結合反應，所述針對白細胞標志蛋白質的標記抗體修飾有熒光基團，且與CTCs細胞類型熒光基團互不相同。

6.根據權利要求1至5任一項所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，所述脫氧核糖核苷酸雙鏈的堿基序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

7.根據權利要求6所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，所述脫氧核糖核苷酸雙鏈中的一條單鏈的5’端設有氨基，用于連接捕獲抗體，適配體連接于該單鏈的3’端，或者適配體連接于另一條單鏈的5’端；

或所述脫氧核糖核苷酸雙鏈中的一條單鏈的3’端設有氨基，用于連接捕獲抗體，適配體連接于該單鏈的5’端，或適配體連接于另一條單鏈的3’端。

8.根據權利要求7所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，堿基序列如SEQ ID NO:1的脫氧核糖核苷酸鏈的5’設有氨基基團，脫氧核糖核苷酸鏈通過該氨基基團與捕獲抗體相連；堿基序列如SEQ ID NO:2的脫氧核糖核苷酸鏈的5’連接有適配體。

9.根據權利要求1至5任一所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，所述適配體為生物素，所述特異性結合物為相應的鏈霉親和素。

10.根據權利要求5所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，白細胞標志蛋白質為CD45。

11.根據權利要求3至5任一項所述的基于微流控技術的CTC蛋白質分型試劑盒，其特征在于，所述CTCs標志蛋白質為選自EpCAM、E-cadherin、KTR18和KTR19為上皮細胞標志蛋白質，和選自N-cadherin、vimentin、fibronectin、ZEB1和SNAI1作為間質細胞標志物蛋白質。