[發明專利]一種3?氨基哌啶異構體的HPLC檢測方法

有效

• 申請號: 201610043276.7
• 申請日: 2016-01-23
• 公開（公告）號: CN105699582B
• 公開（公告）日: 2017-05-03
• 發明（設計）人: 孫鳳霞;蒲寒瑩;孔飛飛;張琛;周蒙;白少玲
• 申請（專利權）人: 河北科技大學
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 石家莊新世紀專利商標事務所有限公司13100
• 代理人: 劉磊娜

技術領域

本發明屬于藥物分析技術領域，具體涉及一種3-氨基哌啶異構體的HPLC檢測方法。

背景技術

(R)-3-氨基哌啶是Ⅱ型糖尿病新藥利拉利汀、阿格列汀的重要中間體。利拉利汀、阿格列汀分子結構中只有一個手性中心，由中間體(R)-3-氨基哌啶引入，因此 (R)-3-氨基哌啶的光學純度直接決定了利拉利汀、阿格列汀的光學純度和藥效。

王燦輝等（CN103435538 B）采用3-氨基哌啶的1,3位氮上分別用叔丁氧羰基取代，采用chiralpark AD-H 4.6×250手性色譜柱在215nm對其進行分析，流動相為正己烷，流速1.0 mL/min，保留時間未報道。孫鳳霞等(CN104007202A CN104034814A)采用苯甲酰氯為衍生化試劑對3-氨基哌啶分別進行單衍生化和雙衍生化，使用CHIRAL-AGP(150×4.6mm)手性柱，在254nm下對衍生物進行分析。Watanabe等人（Tetsuya Assignee Sumitomo Chemical Co.,Ltd., Japan 2009）采用氯甲酸丙酯為衍生化試劑對3-氨基哌啶進行衍生，采用CHIRALCEL AS-RH (150×4.6mm) 手性柱在254nm下對衍生物進行分析，其流動相組成為70:30（V:V）的水:乙腈，流速1.0mL/min，(S)-衍生物19.1min出峰，(R)-衍生物31.5min出峰。所需檢測時間過長及手性柱價格昂貴。Meek等(WO2011160037)采用Crownpak^TM CR+(150×4.6 mm)手性柱，示差折光檢測器直接對3-氨基哌啶進行檢測，其流動相為95:5（V:V）的HClO₄ (pH=1) : MeOH，柱溫0℃，流速0.6mL/min，(S)-3-氨基哌啶3.0min出峰，(R)-3-氨基哌啶3.7min出峰。但實際上示差折光檢測器對分析的樣品量要求很大，誤差大，手性柱價格昂貴。。而通過與帶紫外吸收的手性試劑進行快速衍生化，得到既有紫外吸收又形成兩個手性基團的衍生物，能夠直接在反相高效液相與紫外聯用上進行異構體的分析。

相比示差折光檢測器，紫外檢測器具有更高的靈敏度和穩定性。但由于3-氨基哌啶及其手性異構體紫外吸收很弱，使用常規的紫外檢測存在末端吸收干擾等問題，采用衍生化方法使之紫外吸收增強從而提高檢測靈敏度，再通過反相液相色譜進行分析檢測。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種3-氨基哌啶異構體的HPLC檢測方法，使用普通C18柱，可以快捷準確的實現定性、定量和對映體過量率分析。

為了實現上述目的，本發明采取的技術方案如下：

一種3-氨基哌啶異構體的HPLC檢測方法，具體包含如下步驟：

步驟一、衍生化

將3-氨基哌啶溶于有機溶劑中，在一定的溫度條件下，以(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯為衍生化試劑，控制3-氨基哌啶和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩爾比，進行單衍生化反應，得到衍生化后的3-氨基哌啶，反應式見式I；

步驟二、分離檢測

采用反相高效液相色譜-紫外檢測器對衍生化后的3-氨基哌啶進行定性、定量和對映體過量率測定。

所述的有機溶劑選自氯仿、四氯化碳、石油醚、甲苯、四氫呋喃、二氯甲烷和己烷中的一種或兩種以上的組合。

所述的有機溶劑與3-氨基哌啶的體積比為1~300:1，優選的為5~20:1。

所述低溫條件下指反應溫度為-20℃~20℃，優選的為-5℃~5℃。

所述的3-氨基哌啶和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩爾比為1:0.5~1。

所述的紫外檢測器的檢測波長為210~300nm，優選220~260nm。

所述的所述的高效液相使用的色譜柱是普通反相柱，優選的色譜柱為反相C18柱。

所述的反相高效液相色譜的流動相由緩沖鹽溶液和有機溶劑組成，有機溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、正丙醇、四氫呋喃、丙酮和乙腈中的一種或兩種以上；有機溶劑占流動相的體積比例范圍為20%~80%，優選30%~50%。

所述的流動相緩沖鹽選自磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀中的一種或兩種，所述緩沖鹽溶液的質量體積濃度為0.01%~10%，優選0.1%~1%。