[發(fā)明專(zhuān)利]一種卡那霉素殘留的可視檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610040365.6
• 申請(qǐng)日: 2016-01-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105699309A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許媛媛;盧辰赫;孫楊楊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/33
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/33
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種基于核酸適體的卡那霉素殘留的可視化檢測(cè)方法及應(yīng)用，其特征是基于卡那霉素的保 護(hù)機(jī)制和基于核酸適體的選擇機(jī)制。保護(hù)機(jī)制是利用銀納米大的比表面積將卡那霉素吸附 于銀納米表面，加入高濃度氯化鈉，銀納米在404nm有吸收峰，證實(shí)該物質(zhì)對(duì)銀納米有 保護(hù)；選擇機(jī)制是在卡那霉素與銀納米的混液中，加入與卡那霉素有高親和力的核酸適體， 使卡那霉素脫離銀納米表面，此時(shí)加入高濃度氯化鈉，銀納米在404nm處的吸收峰消失， 證實(shí)該物質(zhì)即為與適體有高親和力的卡那霉素；利用404nm處紫外吸收峰的變化與卡那 霉素濃度的關(guān)系，即可實(shí)現(xiàn)卡那霉素的測(cè)定；同時(shí)，由于銀納米的吸收峰處于可見(jiàn)光區(qū)， 亦可通過(guò)肉眼實(shí)現(xiàn)卡那霉素的檢測(cè)；方法包括以下步驟：卡那霉素的保護(hù)機(jī)制，核酸適體 的選擇機(jī)制，卡那霉素濃度的計(jì)算與牛奶中卡那霉素殘留的檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡那霉素檢測(cè)的方法，其特征是卡那霉素的保護(hù)機(jī)制。將25μL含 有不同濃度的卡那霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到100μL銀納米溶液中于室溫孵化五分鐘，之后加入 50μL綁定溶液(10mMTris-HCl，50mMNaCl，5mMKCland5mMMgCl2)，于室溫孵育 10分鐘，加入25μL含有2.0MNaCl溶液繼續(xù)反應(yīng)30秒，測(cè)量600nm-300nm波長(zhǎng)范圍內(nèi) 的紫外吸收。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡那霉素檢測(cè)的方法，其特征是核酸適體的選擇機(jī)制。將25μL含 有不同濃度的卡那霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到100μL銀納米溶液中于室溫孵化五分鐘，之后加入 50μL含1.0μM卡那霉素核酸適配體的綁定溶液(10mMTris-HCl，50mMNaCl，5mMKCl and5mMMgCl2)于室溫孵育10分鐘，加入25μL含有2.0MNaCl溶液繼續(xù)反應(yīng)30秒， 測(cè)量600nm-300nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的紫外吸收。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡那霉素檢測(cè)的方法，其特征是卡那霉素濃度的計(jì)算與牛奶中卡那 霉素殘留的檢測(cè)。以權(quán)利要求2中404nm處的紫外吸收峰值減去相同濃度的卡那霉素標(biāo)準(zhǔn) 溶液于權(quán)利要求3中測(cè)得的404nm處的紫外吸收峰值的差值為縱坐標(biāo)，不同濃度的卡那霉 素的橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性方程；以稀釋5倍的牛奶分別替代上述權(quán)利要求2 和權(quán)利要求3中的卡那霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)量紫外吸收，將測(cè)得的權(quán)利要求2和權(quán)利要求3 中的差值代入線(xiàn)性方程，可計(jì)算出牛奶中卡那霉素的濃度。