[發明專利]一種快速檢測絲狀真菌合成低聚果糖能力的平板顯色方法

有效

• 申請號: 201610040343.X
• 申請日: 2016-01-21
• 公開（公告）號: CN105463062B
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 鐘耀華;張靜;李寧;謝益佳;寧占國;周煥霞
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12Q1/54
• 分類號: C12Q1/54;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

本發明公開了一種快速檢測絲狀真菌合成低聚果糖能力的平板顯色方法，是將待測的絲狀真菌和標準菌的新鮮孢子懸液點種于察氏固體培養基的平板上，各菌株孢子之間點種距離不小于2cm，30℃培養5h，將葡萄糖檢測液直接倒在以上長有菌落的平板上，并使其均勻覆蓋平板上的所有培養基表面，40℃靜置10min，觀察菌落周圍形成的紅色暈圈，比較待測菌株與標準菌株形成的紅色暈圈的大小，若紅色暈圈比標準菌株形成的大即可判定該待測菌株合成低聚果糖能力強，若紅色暈圈比標準菌株形成的小即可判定該待測菌株合成低聚果糖能力弱。本發明方法操作簡單，成本低廉，是一種簡便、高效、可靠的適用于鑒定絲狀真菌合成低聚果糖能力的方法，具有工業應用價值，值得推廣。

技術領域

本發明涉及檢測絲狀真菌合成低聚果糖能力的方法，屬于檢測技術領域。具體地說是涉及一種快速檢測絲狀真菌合成低聚果糖能力的平板顯色方法。

背景技術

低聚果糖(Fructo-oligosaccharides，簡寫為FOS)又稱功能性果寡糖，是一種典型的益生元物質，廣泛存在于洋蔥、菊芋、香蕉、梨、小麥和蜂蜜等天然產物中，目前在國內外已被廣泛地應用于藥品、食品、保健品、飼料等產品的開發和生產中。其分子式為G-F-Fn(G為葡萄糖，F為果糖，n＝1～3)，是蔗糖分子上以β-1，2糖苷鍵結合數個D-果糖所形成的蔗果三糖(GF₂)、蔗果四糖(GF₃)、蔗果五糖(GF₄)及其混合物的總稱，結構式如下。

低聚果糖甜度是蔗糖的0.3-0.6倍，既保持了蔗糖的純正甜味性質，又比蔗糖甜味清爽。低聚果糖具有重要的生理學功能：促進腸道益生菌如雙歧桿菌的增殖、減少和抑制腸內腐敗物質的產生、降低膽固醇和甘油三酯水平、促進人體內維生素B族合成及鈣離子吸收等，同時又具有低熱值、防齲齒、提高免疫力和抗病力等功能，所以近年來人們對低聚果糖的關注和需求與日俱增。

人們對低聚果糖的大量需求，使得低聚果糖產業得以發展。但是天然蔬菜和水果中低聚果糖含量非常有限，不利于提純和生產，因此，工業上一般采用具有低聚果糖合成酶活性(果糖基轉移酶，Fructosyltransferase，FTase，EC 2.4.1.9；β-呋喃果糖苷酶，β-fructofuranosidase，Ffase，EC 3.2.1.26)的微生物進行發酵，以蔗糖為原料合成具有高附加值的低聚果糖。酶法合成過程中，一分子蔗糖作為供體，一分子蔗糖作為受體，酶作用于供體蔗糖斷裂α-1，2糖苷鍵生成果糖基和葡萄糖，果糖基在轉移酶作用下以β-1，2糖苷鍵形式連接到受體蔗糖分子上形成蔗果三糖，以此方式繼續生成蔗果四糖和蔗果五糖，每添加一分子果糖基的同時釋放出一分子葡萄糖。所以，葡萄糖含量的多少間接反映了微生物合成低聚果糖能力的強弱。相關文獻報道，具有低聚果糖合成酶活性的微生物包括絲狀真菌、酵母和細菌，其中具有低聚果糖合成酶活性的絲狀真菌較為普遍，包括黑曲霉(Aspergillus niger)、日本曲霉(Aspergillus japonicus)、棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、出芽短梗霉(Aureobasium pullulans)等十幾種，但其僅有少數幾種產生的低聚果糖合成酶能夠應用于工業上大量生產低聚果糖，因此，加快低聚果糖產業發展的研究重點是進一步篩選具有較高低聚果糖合成酶活性的優良絲狀真菌。

目前，檢測和比較絲狀真菌合成低聚果糖能力的方法主要有：3,5-二硝基水楊酸法(DNS法)、薄層層析分離法(TLC法)和高效液相色譜法(HPLC法)等。這些方法操作過程復雜、耗時長且成本高(如色譜法)，大大減緩了工業用生產低聚果糖絲狀真菌的篩選進程。所以，研發一種能夠快速衡量絲狀真菌合成低聚果糖能力的檢測方法甚為關鍵。經檢索，有關基于培養基平板并利用雙酶法定性檢測葡萄糖的產生而間接反映絲狀真菌合成低聚果糖能力的檢測方法在相關專利和文獻中還未見報道。

發明內容

針對現有技術述的不足，本發明的目的是提供一種快速檢測絲狀真菌合成低聚果糖能力的平板顯色方法。