[發明專利]利用免疫層析法的變應原檢測方法

有效

• 申請號: 201610040264.9
• 申請日: 2010-02-23
• 公開（公告）號: CN105651994B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 加藤重城;秋元政信
• 申請（專利權）人: 普利瑪火腿株式會社
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 杜艷玲;石克虎

可從含有各變應原的食品等被測試樣中高效地提取各變應原，且由于不使用還原劑而消除伴隨著結合于抗體的膠體金的崩解的非特異性反應，從而迅速且精度良好地檢測變應原。使用將膠體金結合于抗變性和未變性的變應原的單克隆抗體的膠體金標記抗體、固定有與上述膠體金標記抗體識別不同的抗原決定簇的單克隆抗體的展開支持體、使用SDS等陰離子型表面活性劑和硫代硫酸鹽、或SDS等陰離子型表面活性劑和Tween20等非離子型表面活性劑而從被測試樣中提取出的變應原的測定樣品、和展開液，將展開液在展開支持體上展開后，根據有無膠體金的聚集來檢測變應原的免疫層析法，其中，使用含有FBS至少10％的展開液。

本申請是國際申請日為2010年2月23日、國際申請號為PCT/JP2010/001209、進入國家階段的申請號為201080007948.X、發明名稱為“利用免疫層析法的變應原檢測方法”的PCT申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及利用免疫層析法的變應原的檢測方法和可在其中使用的免疫層析用變應原的檢測試劑盒，所述方法中，使用陰離子型表面活性劑和硫代硫酸鹽從含有各種變應原的食品等被測試樣中提取各變應原，不論是各變應原為變性/未變性的哪一狀態，都可用陰離子型表面活性劑和硫代硫酸鹽、或陰離子型表面活性劑和非離子型表面活性劑高效地提取，此外，可抑制伴隨著結合于抗體的膠體金的崩解的非特異性反應、而迅速地進行檢測。

背景技術

由于自然環境的減少、從車輛和工廠等排放的廢氣、居住情況等、或食物的變化等各種因素，現今，據說3人中就有1人患有某種過敏疾病。尤其是，食物過敏是食品中含有的過敏誘發物質（下面稱為食物變應原）的攝取所引起的有害免疫反應，引起皮炎、哮喘、胃腸道紊亂、過敏性休克等，隨著這種食物變應性患者的增加，在醫學上和食品工業上產生深刻的問題。這些危害有時導致死亡，故需要在其發生前實施處置。因此，通過標示（indication）來向消費者提供信息的必要性提高，FAO/WHO聯合食品標準委員會，針對含有已知為過敏物質的8種原材料的食品，就含有其的要旨的標示達成一致，認為成員國應探討適于各國制度的標示方法（1999年6月）。在日本，考慮到過去的健康危害等的程度、頻率而對引起過重癥變態反應癥狀的24種食品規定了其標示方法（2002年4月起施行）。作為引起變態反應的食品，已知有蛋類、乳類、肉類、魚類、甲殼類和軟體動物類、谷類、豆類和堅果類、果實類、蔬菜類、啤酒酵母或明膠等。

為了迅速簡便地檢測上述變應原，作為利用依賴于抗原-抗體的特異性反應檢測由特定的抗原或抗體構成的被檢測物質的免疫測定法，通過免疫反應使樣品中的被檢測物質與對微粒敏感的抗體或抗原結合，測定由于結合而產生的微粒的凝集狀態的凝集法是簡便的免疫測定法，尤其是從可以目視判斷這點考慮，是通常使用的方法。

此外，利用免疫反應使試樣中的被檢測物質與由包括放射性同位素、酶或熒光物質的標記物質標記的抗體或抗原結合，測定該結合的標記物質的放射免疫測定法、酶免疫測定法或熒光免疫測定法也正在被采用。在這些免疫測定法中，競爭型反應、夾心型反應正在被廣泛使用。其中，作為所謂的夾心型反應的測定法，已知有免疫層析法（例如，參照專利文獻1），除了歸因于抗原抗體反應的高特異性之外，以簡便、迅速為特征的各種變應原檢測試劑盒正在被銷售。

作為適用于所述免疫層析法的試樣，有生物試樣和來自食品的提取物等，但是根據試樣的種類不同，有時盡管不存在標本（specimen），也會發生在捕獲部位呈現淡顯色的所謂非特異性反應，有時導致檢測的準確性的降低。因此，提出了防止測定時的非特異性凝集和非特異性反應，因而可高準確度地進行測定的展開溶劑，其特征在于，在緩沖液中以0.005~0.3w/v％的濃度含有具有磷酸膽堿基團的聚合物且該聚合物的數均分子量為40,000以上（例如，參照專利文獻2）。