[發明專利]豬圓環病毒抗體檢測卡及其制備方法

在審

• 申請號: 201610039823.4
• 申請日: 2016-01-21
• 公開（公告）號: CN105527429A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 吳俊清;章健;吳冠英;王澤洲;王正財
• 申請（專利權）人: 成都微瑞生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種檢測卡，特別是涉及一種用于快速定量檢測豬血清中豬圓環病毒抗體的檢測卡及其制備方法。

背景技術

豬圓環病毒2型（Porcinecircovirustype2,PCV2）是20世紀90年代，世界范圍內人們在病豬及一些無明顯臨床癥狀豬體內檢測到了一種新型豬小環狀樣病毒（Allan和Ellis，2000）。該病毒與已知的由PK-15細胞培養污染而分離的PCV不同，有人建議將原來的PCV命名為圓環病毒Ⅰ型（PCV-1），將新出現的與臨床疾病相關的PCV命名為圓環病毒Ⅱ型（PCV-2）。PCV-2感染后會出現斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎腎病綜合征（PNDS）、豬呼吸系統混合疾病、繁殖障礙綜合征等?，F在把由PCV2引起的多種病癥均叫“豬圓環病毒病”。PCV2中，PMWS對養豬業造成的危害最為嚴重，它主要引起豬漸進性消瘦、腹瀉、呼吸道癥狀、皮膚蒼白或出現黃疸、生產性能降低。另外PCV2還侵害豬的免疫系統，抑制豬的免疫功能，還能與豬藍耳病、流感、支原體肺炎、副豬嗜血桿菌和鏈球菌等疫病病原相互作用，加重這些病的危害。給養豬業造成巨大的經濟損失。

疫苗免疫是我國豬圓環防控的主要手段，采集免疫后豬血清，并檢測血清中豬圓環2病毒抗體的效價是監控豬圓環的主要方法，也就是評價豬圓環疫苗免疫效果、免疫程序和監控豬圓環病毒的抵抗能力，也是適時注射疫苗的主要依據。

市面上有豬圓環病毒抗體膠體金快速檢測卡，通過對樣品的檢測，即可粗略判斷豬體內是豬圓環抗體含量，獸醫根據檢測結果判斷是否需要注射豬圓環疫苗。

同樣市場上也大量使用檢測豬圓環病毒抗體酶標試劑盒，即ELISA酶標試劑盒，ELISA試劑盒需要酶標儀、溫育反應條件、洗板條件，操作工作環境和專業技術人員，另外檢測樣本還需要需要復雜的前處理，如采集血液，分離血清等；而快速膠體金雖然檢測方便，不需專業技術人員和工作環境，但其檢測的靈敏度低，且只能定性，檢測范圍窄。而本專利豬圓環抗體試劑盒就克服了以上兩類試劑盒的各自缺點，操作簡單，實現現場、快速、準確、高靈敏地定量（半定量）檢測。

發明內容

本發明的目的就是提供一種豬圓環病毒抗體檢測卡及其制備方法，能完全解決上述現有技術的不足之處。

本發明的目的通過下述技術方案來實現：

一種豬圓環病毒抗體檢測卡，包括裝配在外殼內的檢測卡本體，所述檢測卡本體包括底板，在底板上從左至右依次粘貼樣品墊、標記墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，且樣品墊的右端搭在標記墊的左端上，標記墊的右端搭在硝酸纖維素膜的左端上，吸水紙左端搭在硝酸纖維素膜的右端上，所述標記墊由載體基層和標記物組成，標記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測微球和鑭系熒光質控微球形成的一層膜，所述檢測微球和質控微球均為表面帶有羥基或氨基的硅膠微球或聚苯乙烯微球，所述硝酸纖維素膜上包被豬圓環抗原為檢測線，包被羊抗雞抗體為質控線，在外殼上對應樣品墊開設加樣孔，對應硝酸纖維素膜上的檢測線和質控線開設視窗孔。

作為優選，所述檢測微球為標記有豬圓環抗原的微球，質控微球為標記有雞lgY或兔lgG的質控微球。

作為優選，所述硝酸纖維素膜上的檢測線和標記墊上采用的豬圓環抗原均為滅活豬圓環病毒抗原、豬圓環疫苗、豬圓環病毒衣殼蛋白PCV2-Cap或豬圓環病毒2多肽；所述硝酸纖維素膜上質控線采用的羊抗雞抗體為羊抗雞lgY的lgG或者羊抗兔lgG。

作為優選，所述檢測微球和質控微球均為表面帶有羥基或氨基的硅膠微球或聚苯乙烯微球。

作為優選，所述標記在生物原料上的鑭系熒光微球的鑭系熒光是指鑭系元素Eu、Sm或Tb與β－二酮配基產生的熒光。其發光效率高、吸收光譜寬、發射光譜很窄、斯特克斯位移寬，使其熒光光譜分析的靈敏度很高。

作為優選，所述樣品墊為檢測血清或血漿的樣品墊，或者為檢測全血的樣品墊。

作為優選，本檢測卡利用豬血樣品中豬圓環病毒抗體、豬圓環病毒抗原的標記物和硝酸纖維素膜上包被豬圓環病毒抗原通過雙抗原夾心法來檢測豬血樣本中豬圓環病毒抗體。

作為優選，本檢測卡為定量層析檢測卡，它是通過檢測儀檢測層析后檢測卡的檢測線和質控線發出的熒光信號，然后根據此批檢測卡的IC卡儲存的標準曲線，再由檢測線和質控線的熒光信號從標準曲線計算出待檢物的濃度。

一種豬圓環病毒抗體檢測卡的制備方法，其特征在，包括以下步驟：