[發(fā)明專利]一種金納米比色法快速檢測牛奶中三聚氰胺的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610039284.4
• 申請日: 2016-01-21
• 公開（公告）號: CN105527288B
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳芳英;李劍芳;萬益群
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號: G01N21/79
• 分類號: G01N21/79
• 代理公司: 南昌市平凡知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 36122
• 代理人: 夏材祥

1.一種金納米比色法快速檢測牛奶中三聚氰胺的方法，其特征在于：利用修飾在金納米表面的對氯苯磺酸上的氯與三聚氰胺上氨基的氫產(chǎn)生氫鍵作用，使得分散的金納米粒子聚集，并且金納米粒子的特征吸收峰發(fā)生紅移，從而實(shí)現(xiàn)對三聚氰胺的檢測；

具體步驟為：

(1)金納米粒子的制備:

所用的玻璃儀器都經(jīng)過王水浸泡，用超純水清洗后，置于烘箱干燥后備用，向潔凈的三頸燒瓶中加入10.3μL質(zhì)量濃度為4g/L的氯金酸，加入89.7mL超純水，置于100℃油浴鍋內(nèi)攪拌加熱，至其沸騰，加入10mL質(zhì)量濃度為38.8mM的檸檬酸三鈉溶液，加熱攪拌，溶液顏色從淡黃色變成酒紅色，反應(yīng)持續(xù)十五分鐘后停止加熱，繼續(xù)攪拌至室溫，用超純水將溶液定容到100mL，裝于100mL容量瓶，4℃下保存，所制得的金納米粒子平均粒徑為13.08nm；

(2)對氯苯磺酸-金納米的制備：

金納米與對氯苯磺酸以體積比為40:1進(jìn)行修飾，修飾所需時間為0.5小時，將修飾好的溶液用pH＝6.8的PBS緩沖溶液以體積比為1:5進(jìn)行稀釋，備用；

(3)利用比色法檢測三聚氰胺：

向已制備好的對氯苯磺酸-金納米中加入不同濃度的三聚氰胺溶液標(biāo)準(zhǔn)品，混勻，由于修飾在金納米表面的對氯苯磺酸上的氯與三聚氰胺上氨基上的氫產(chǎn)生了氫鍵作用，使得分散的金納米粒子聚集，體系由酒紅色變?yōu)樗{(lán)色，5分鐘后檢測溶液的紫外可見光譜，得到不同濃度三聚氰胺對應(yīng)的紫外可見光譜，使用吸光度比值A(chǔ)_650nm/A_520nm作為縱坐標(biāo)，三聚氰胺濃度為橫坐標(biāo)，繪制三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)A_650nm/A_520nm與三聚氰胺的濃度建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線，三聚氰胺的檢出限為2.3nM，線性范圍為6.0×10^-7-1.5×10^-6mol/L；

(4)實(shí)際樣品檢測：

牛奶的檢測：向2.0g待測液態(tài)奶中加入不同濃度的三聚氰胺標(biāo)樣，再加入到1.5mL質(zhì)量濃度為10％的三氯乙酸水溶液和5.0mL乙腈的混合溶液中，超聲震蕩15min后轉(zhuǎn)移到離心管中，12000rpm/min轉(zhuǎn)速下離心15min，取上清液，并通過0.22μm膜過濾器移去脂肪，再將濾液的pH調(diào)至6.8，離心后再次通過0.22μm膜過濾器過濾，將濾液用二次超純水稀釋至10mL，取20μL樣品溶液加入到步驟(2)制備的對氯苯磺酸-金納米復(fù)合物中，對其進(jìn)行測定，根據(jù)所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線與加入的標(biāo)準(zhǔn)樣品，計算出所測得的三聚氰胺濃度，測定樣品回收率＝牛奶中三聚氰胺的測定值/三聚氰胺標(biāo)樣加入量×100％；

奶粉的檢測：將0.6g待測奶粉用超純水2.0mL溶解后加入不同濃度的三聚氰胺標(biāo)樣，再加入到1.5mL質(zhì)量濃度為10％的三氯乙酸水溶液和5.0mL乙腈的混合溶液中，超聲震蕩15min后轉(zhuǎn)移到離心管中，12000rpm/min轉(zhuǎn)速下離心15min，取上清液，并通過0.22μm膜過濾器移去脂肪，再將濾液的pH調(diào)至6.8，離心后再次通過0.22μm膜過濾器過濾，將濾液用二次超純水稀釋至10mL，取20μL樣品溶液加入到步驟(2)制備的對氯苯磺酸-金納米復(fù)合物中，金納米粒子的聚集程度將隨著三聚氰胺濃度的不同而改變，根據(jù)所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線與加入的標(biāo)準(zhǔn)樣品，計算出所測得的三聚氰胺濃度，測定樣品回收率＝奶粉中三聚氰胺的測定值/三聚氰胺標(biāo)樣加入量×100％。