[發(fā)明專利]一種高效誘導(dǎo)雜種檀香體細(xì)胞胚胎發(fā)生與植株再生的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610038247.1 | 申請日： | 2016-01-20 |
| 公開（公告）號： | CN105684898B | 公開（公告）日： | 2018-01-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張新華;馬國華;牛美云;吳坤林;曾宋君 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院華南植物園 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司44001 | 代理人： | 劉明星 |
| 地址： | 510650 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高效 誘導(dǎo) 雜種 檀香 體細(xì)胞 胚胎 發(fā)生 植株 再生 方法 | ||
1.一種高效誘導(dǎo)雜種檀香體細(xì)胞胚胎發(fā)生與植株再生的方法，其特征在于，包括以下步驟：
a、胚性愈傷組織的誘導(dǎo)與增殖：以雜種檀香的幼嫩莖作為外植體，進(jìn)行消毒，將消毒后的外植體接種至胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得胚性愈傷組織，將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)接到新的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，獲得胚性細(xì)胞，所述的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基每升含有2,4-D 0.5-1.0mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為MS培養(yǎng)基，所述的雜種檀香是父本檀香(Santalum album)和母本斐濟(jì)檀香(Santalum yasi)的有性雜交種F1代；
b、體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)與成熟：將胚性細(xì)胞轉(zhuǎn)接到體細(xì)胞胚胎誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)體細(xì)胞胚的發(fā)生，獲得體細(xì)胞胚，挑選體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)入體細(xì)胞胚成熟培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得成熟的子葉胚，所述的體細(xì)胞胚胎誘導(dǎo)培養(yǎng)基每升含有6-BA 0.2-0.5mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為MS培養(yǎng)基，所述的體細(xì)胞胚成熟培養(yǎng)基每升含有6-BA 0.05-0.1mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為MS培養(yǎng)基；
c、體細(xì)胞胚萌發(fā)與植株再生：挑取成熟的子葉胚轉(zhuǎn)入體細(xì)胞胚萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得萌發(fā)的體細(xì)胞胚，將萌發(fā)的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)移到植株再生培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得完整的再生植株，所述的體細(xì)胞胚萌發(fā)培養(yǎng)基每升含有6-BA 0.2-0.5mg、GA3 0.5-1mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為MS培養(yǎng)基，所述的植株再生培養(yǎng)基每升含有6-BA 0.2-1mg、IBA 0.2-1mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為1/2MS培養(yǎng)基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效誘導(dǎo)雜種檀香體細(xì)胞胚胎發(fā)生與植株再生的方法，其特征在于，所述的以雜種檀香的幼嫩莖作為外植體，進(jìn)行消毒，是將外植體先用體積分?jǐn)?shù)50％的酒精水溶液擦拭外植體2-3次，然后在超凈工作臺上先用體積分?jǐn)?shù)75％酒精水溶液浸泡30秒，無菌水沖洗后放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％HgCl2溶液中浸泡5～6min，每隔2分鐘搖晃1次，無菌水沖洗2-3次，再用體積分?jǐn)?shù)6-12％過氧化氫溶液消毒6-8min，無菌水沖洗3-5次，獲得消毒后的外植體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效誘導(dǎo)雜種檀香體細(xì)胞胚胎發(fā)生與植株再生的方法，其特征在于，
所述的步驟a的將消毒后的外植體接種至胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得胚性愈傷組織，將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)接到新的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)；
所述的步驟b的將胚性細(xì)胞轉(zhuǎn)接到體細(xì)胞胚胎誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)體細(xì)胞胚的發(fā)生，獲得體細(xì)胞胚，挑選體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)入體細(xì)胞胚成熟培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
所述的步驟c的挑取成熟的子葉胚轉(zhuǎn)入體細(xì)胞胚萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得萌發(fā)的體細(xì)胞胚，將萌發(fā)的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)移到植株再生培養(yǎng)基上培養(yǎng)；
其培養(yǎng)條件都為光照強(qiáng)度1000-2000lx，光照時間10h/d，培養(yǎng)溫度26±2℃。
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