[發明專利]一種高效誘導雜種檀香體細胞胚胎發生與植株再生的方法

有效

• 申請號: 201610038247.1
• 申請日: 2016-01-20
• 公開（公告）號: CN105684898B
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 張新華;馬國華;牛美云;吳坤林;曾宋君
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司44001
• 代理人: 劉明星

1.一種高效誘導雜種檀香體細胞胚胎發生與植株再生的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、胚性愈傷組織的誘導與增殖：以雜種檀香的幼嫩莖作為外植體，進行消毒，將消毒后的外植體接種至胚性愈傷組織誘導培養基上培養，獲得胚性愈傷組織，將胚性愈傷組織轉接到新的胚性愈傷組織誘導培養基中進行繼代增殖培養，獲得胚性細胞，所述的胚性愈傷組織誘導培養基每升含有2,4-D 0.5-1.0mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為MS培養基，所述的雜種檀香是父本檀香(Santalum album)和母本斐濟檀香(Santalum yasi)的有性雜交種F1代；

b、體細胞胚的誘導與成熟：將胚性細胞轉接到體細胞胚胎誘導培養基上誘導體細胞胚的發生，獲得體細胞胚，挑選體細胞胚轉入體細胞胚成熟培養基中培養，獲得成熟的子葉胚，所述的體細胞胚胎誘導培養基每升含有6-BA 0.2-0.5mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為MS培養基，所述的體細胞胚成熟培養基每升含有6-BA 0.05-0.1mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為MS培養基；

c、體細胞胚萌發與植株再生：挑取成熟的子葉胚轉入體細胞胚萌發培養基中培養，獲得萌發的體細胞胚，將萌發的體細胞胚轉移到植株再生培養基上培養，獲得完整的再生植株，所述的體細胞胚萌發培養基每升含有6-BA 0.2-0.5mg、GA₃ 0.5-1mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為MS培養基，所述的植株再生培養基每升含有6-BA 0.2-1mg、IBA 0.2-1mg、蔗糖20-30g、瓊脂6-7g，余量為1/2MS培養基。

2.根據權利要求1所述的高效誘導雜種檀香體細胞胚胎發生與植株再生的方法，其特征在于，所述的以雜種檀香的幼嫩莖作為外植體，進行消毒，是將外植體先用體積分數50％的酒精水溶液擦拭外植體2-3次，然后在超凈工作臺上先用體積分數75％酒精水溶液浸泡30秒，無菌水沖洗后放入質量分數0.1％HgCl₂溶液中浸泡5～6min，每隔2分鐘搖晃1次，無菌水沖洗2-3次，再用體積分數6-12％過氧化氫溶液消毒6-8min，無菌水沖洗3-5次，獲得消毒后的外植體。

3.根據權利要求1所述的高效誘導雜種檀香體細胞胚胎發生與植株再生的方法，其特征在于，

所述的步驟a的將消毒后的外植體接種至胚性愈傷組織誘導培養基上培養，獲得胚性愈傷組織，將胚性愈傷組織轉接到新的胚性愈傷組織誘導培養基中進行繼代增殖培養；

所述的步驟b的將胚性細胞轉接到體細胞胚胎誘導培養基上誘導體細胞胚的發生，獲得體細胞胚，挑選體細胞胚轉入體細胞胚成熟培養基中培養；

所述的步驟c的挑取成熟的子葉胚轉入體細胞胚萌發培養基中培養，獲得萌發的體細胞胚，將萌發的體細胞胚轉移到植株再生培養基上培養；

其培養條件都為光照強度1000-2000lx，光照時間10h/d，培養溫度26±2℃。