[發明專利]一種提高大腸桿菌生產丁醇的方法有效
| 申請號： | 201610035150.5 | 申請日： | 2016-01-19 |
| 公開（公告）號： | CN105505971B | 公開（公告）日： | 2019-03-12 |
| 發明（設計）人： | 董紅軍;趙春華;張延平;李寅 | 申請（專利權）人： | 中國科學院微生物研究所 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12P7/16;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢;白艷 |
| 地址： | 100101 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提高 大腸桿菌 生產 丁醇 方法 | ||
1.一種構建重組菌的方法，為抑制或沉默生產丁醇的出發菌基因組上的蘋果酸脫氫酶基因mdh表達，得到重組菌；
所述生產丁醇的出發菌為大腸桿菌EB205 CGMCC No.11985。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述抑制或沉默生產丁醇的出發菌基因組上的蘋果酸脫氫酶基因mdh表達為敲除生產丁醇的出發菌基因組上的蘋果酸脫氫酶基因mdh。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述敲除生產丁醇的出發菌基因組上的蘋果酸脫氫酶基因mdh采用λ-red同源重組系統、sacB基因介導篩選的同源重組系統或CRISPR/Cas系統。
4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述敲除生產丁醇的出發菌基因組上的蘋果酸脫氫酶基因mdh為采用λ-red同源重組系統將生產丁醇的出發菌基因組上的蘋果酸脫氫酶基因mdh替換為兩端帶有FRT的標記基因。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述標記基因為卡那霉素抗性基因；
所述兩端帶有FRT的標記基因片段的核苷酸序列為序列表中序列2第41-1534位。
6.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：
所述蘋果酸脫氫酶的氨基酸序列為序列3；
所述蘋果酸脫氫酶mdh基因的核苷酸序列為序列1。
7.由權利要求1-6任一所述方法制備的重組菌。
8.權利要求1-6任一所述方法或權利要求7所述重組菌在生產丁醇或提高丁醇產量中的應用。
9.一種生產丁醇的方法，發酵權利要求7所述重組菌，得到丁醇。
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