[發(fā)明專利]一種能抑制黑色素瘤的羊棲菜提取物

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610031931.7
• 申請(qǐng)日: 2016-01-18
• 公開（公告）號(hào): CN105616449A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢國英;丁浩淼;汪財(cái)生;陳煜;郭海杰;謝琰;顧筱筱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江萬里學(xué)院
• 主分類號(hào): A61K36/03
• 分類號(hào): A61K36/03;A61P35/00
• 代理公司: 寧波誠源專利事務(wù)所有限公司 33102
• 代理人: 胡志萍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種能抑制黑色素瘤的羊棲菜提取物。

背景技術(shù)

黑色素瘤(Maligmantmelanoma)是一種惡性程度較高的黑色素細(xì)胞腫瘤，多發(fā)生 于皮膚，也見于接近皮膚的勃膜如結(jié)膜、口腔、鼻腔、肛管、直腸、子宮頸、陰道、陰 莖、龜頭等等。黑色素瘤一直是西方人的常見病，隨著我國人口疾病譜的變化，似有不 斷上升趨勢(shì)，且有自身特點(diǎn)，如肢端皮膚和勃膜來源居多，而西方人以頭頸、軀干皮膚 為主。雖然手術(shù)切除腫瘤是治療絕大多數(shù)黑色素瘤患者的首選方法，但是在某些患者， 如外科高風(fēng)險(xiǎn)患者、老幼患者和自身虛弱的病人，手術(shù)治療會(huì)給他們帶來巨大的副作用， 術(shù)后也會(huì)容易遺漏微小病灶或轉(zhuǎn)移病灶殘余腫瘤細(xì)胞。因此，藥物治療或局部藥物治療 可能為部分黑色素瘤患者提供一種更好的預(yù)防和治療選擇。

目前臨床上尚無治療黑色素瘤的有效方法，化療藥物對(duì)惡性黑色素瘤雖有一定的療 效，但毒副作用大；目前臨床應(yīng)用的抗黑色素瘤藥物大多為細(xì)胞毒性藥物，在抑制腫瘤 細(xì)胞增殖的同時(shí)，機(jī)體正常細(xì)胞的增殖也被抑制，會(huì)對(duì)正常機(jī)體的生理過程產(chǎn)生不良影 響，故限制了這些藥物的臨床應(yīng)用。因此，尋找高效低毒的抑制黑色素瘤的藥物是目前 藥學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)，而從天然藥物中篩選活性成分是黑色素瘤治療的新方向。

羊棲菜(sargassumfusiforme)隸屬褐藻門(Phaeophuta)墨角藻目(Fucales)馬 尾藻科(Sargassaceae)，又名玉草、六角菜、鹿角尖，在我國遼東半島、山東、浙江、 福建、廣東淺海域均有分布，日本和韓國也有生長。羊棲菜含有豐富的多糖、食物纖維 素、多種維生素、礦物質(zhì)和多種微量元素，且含有人體所需的18種重要氨基酸，包括8 種人體不能合成的必須氨基酸。目前羊棲菜中研究較多的有多糖、氨基酸和蛋白質(zhì)、脂 肪酸等，具有降血脂、抗氧化、降血糖、抗腫瘤和促進(jìn)機(jī)體生長發(fā)育等多種藥理生理活 性。研究表明所述藥理作用可能主要與其所含的羊棲菜多糖有關(guān)。然而目前關(guān)于羊棲菜 多糖在制備抗黑色素瘤藥物方面尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種能抑制黑色素瘤的羊 棲菜提取物。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：該抑制黑色素瘤的羊棲菜提取物， 其特征在于制備方法如下：

將新鮮的羊棲菜洗凈后在40-50℃下烘干3.5-5小時(shí)，然后粉碎成粒度≤60目的羊 棲菜粉末；

向微波超聲波組合萃取儀中加入羊棲菜粉末和蒸餾水，微波超聲時(shí)間為8-12min， 溫度45-55℃、固液比1:8-12g/mL、超聲功率550-650W、微波功率350-450W；

抽濾后取濾液，45-55℃下濃縮至原體積的十分之一，加入無水乙醇使含醇量達(dá) 30-40％，靜置24h，過濾取濾液，45-55℃下濃縮至原體積的五分之一，加入無水乙醇使 含醇量達(dá)到80％，靜置24h，在10000-14000rpm下離心12-18min，取沉淀物；

將沉淀物在-0.08～-0.1MPa下真空干燥，溫度為28-32℃，時(shí)間10-14h；

將干燥后的沉淀物溶于水中，配成濃度為4-6wt％的水溶液作為工作液，將工作液 與Sevage試劑按1:2混合，振搖13-17min，3500-4500rpm下離心4-6min，取上清液；

其中Sevage有機(jī)試劑為氯仿：正丁醇＝4:1(v/v)的混合物；

將得到的上清液在DEAE-52陰離子交換纖維柱進(jìn)行吸附洗脫，洗脫條件為：緩沖 體系為pH值7.2-7.4的磷酸鹽緩沖液，用含0.5～1.0M的NaCl溶液等梯度洗脫DEAE-52 陰離子交換纖維柱，流速為1mL/min，在波長為215nm下監(jiān)測(cè)洗脫液中提取物含量，見 峰收集；然后在3.5KD切向流超濾膜下膜濃縮脫鹽至原體積的五分之一，真空冷凍干燥， 真空度130Pa，溫度為-80℃，時(shí)間為48h；即得到能抑制黑色素細(xì)胞瘤的羊棲菜提取物。

較好的，分別收集0.5M、0.75M和1MNaCl下的洗脫液。

更好地是收集0.5MNaCl下的洗脫液。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所提供的羊棲菜提取物能夠有效抑制黑色素瘤的增殖，誘 導(dǎo)其凋亡，降低黑色素的含量，且副作用小，治療黑色素瘤提供了一種新的途徑和手段。

附圖說明